无泵驱动体外膜肺治疗急性呼吸衰竭犬肺组织内皮素1前体原mRNA的表达_医学论文.docVIP

无泵驱动体外膜肺治疗急性呼吸衰竭犬肺组织内皮素1前体原mRNA的表达_医学论文 无泵驱动体外膜肺治疗急性呼吸衰竭犬肺组织内皮素1前体原mRNA的表达_医学论文 【摘要】 目的: 观察双侧股动脉股静脉无泵驱动体外膜肺（bAVECMO）治疗急性呼吸衰竭犬肺组织内皮素1前体原和内皮素1（ET1）的表达. 方法: 10只犬在建立急性呼吸衰竭模型情况下给予bAVECMO治疗. 分别于模型建立完成时、转流开始后1，2，3，4 h取肺组织. 应用放免及RTPCR技术,观测bAVECMO期间肺组织匀浆ET1变化、肺组织ppET1 mRNA的转录表达变化. 结果：犬ARDS模型肺组织匀浆ET1含量转流2 h达到高值，之后缓慢下降. 方差分析表明肺组织匀浆ET1的均数在转流前后差异有统计学意义. 肺组织匀浆ET1转流3 h与4 h差异无统计学意义. RTPCR对ppET1 mRNA的结果与肺组织匀浆ET1放免结果相一致. 结论：对于急性呼吸衰竭bAVECMO的早期治疗有积极意义. 【关键词】 急性呼吸衰竭 内皮素1 动脉静脉无泵驱动体外膜肺氧合 　　0引言 　　近年来研究发现急性呼吸衰竭(ARF)和急性呼吸窘迫综合症(ARDS)时内皮素1 mRNA表达显著增强，说明ET1参与了急性肺损伤的病理生理过程. 在对ARF、ARDS的治疗中无泵驱动体外膜肺辅助(AV)转流技术(AVECMO)由于其有效并对血液有形成份破坏轻等优点，已被应用于临床［1］. 在应用AVECMO转流中，国外均采用单侧股动脉股静脉ECMO转流，在临床中表现了一定的不足，如引流量不够大，影响了AVECMO的效果；但如应用大口径动脉插管来增加动脉引流，则会严重影响插管侧下肢血液供应等. 本项研究首次采用双侧股动脉股静脉无泵驱动体外膜肺（bAVECMO）转流技术，通过治疗犬急性呼吸衰竭模型，观察肺组织ppET1 mRNA，ET1的变化，为临床提供参考依据. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　选择健康成年家犬10只，雌雄不限，体质量18~35（23.4±4.7) kg,用35 g/L苯巴比妥100 mg/kg腹腔注射麻醉，待犬意识不清时，气管插管与麻醉机连接. 常规消毒铺巾，分别解剖犬左、右两侧的股动脉及股静脉，全身肝素化，用量为1 mg/kg，股动脉，股静脉上、下两端分别套丝线，结扎下端的股动脉、股静脉. 阻断股动脉、股静脉上端，再阻断与结扎血管的中下端，切开血管. 根据动、静脉内径的大小选择不同型号的PVC动、静脉插管，插管后结扎固定以防止脱出，常规缝合皮下、皮肤，防止伤口渗血. 将动、静脉插管与bAVECMO装置连接. 右侧胸部开胸沿着第4肋间进胸，切开心包分别将心包固定在切口边缘，主动脉根部置入测压针管及测压装置，将此装置与飞利浦有创血压、心率动态监护仪连接. 当bAVECMO转流时，通过bAVECMO端口应用1000 mL/L氧气，其用量为(1.2±0.4) L/min. 建立循环后，根据不同的转流时间收集标本. ①在体外循环开始前，经胸部切口取右肺下叶少许组织（10 mm×10 mm），置液氮罐待检测. ②制作呼吸衰竭动物模型进行试验. 应用潘克罗宁（Pancuronrum，0.1～0.2 mg/kg），首次剂量为4 mg，以后每30 min左右追加2 mg使呼吸完全消失. 通过麻醉机调节呼吸频率和潮气量（犬在安静状态下潮气量如体质量在16.4～30.5 kg，潮气量多在251～432 mL）. 采用血气分析仪测定犬动脉血pH值、动脉血氧分压、动脉血氧饱和度及动脉血二氧化碳分压值，当达到呼吸衰竭指标时，经右心房抽血10 mL于注射器内，立即密封置冰盒待检. 另经胸部切口取右肺下叶少许组织（10 mm×10 mm），置冰盒后待检测. 开始bAVECMO转流实验后1, 2, 3, 4 h，分别经右心房抽血10 mL、胸部切口取右肺下叶少许组织（10 mm×10 mm），置液氮罐待检测. 　　1.2方法 　　1.2.1肺组织匀浆ET1含量测定 　　采用SN 695型全自动γ计数器(上海原子核所，放射免疫药盒购自解放军总医院科技开发中心放免所),以放射免疫法测定标本ET1含量. 　　1.2.2肺组织ppET1检测 　　采用RTPCR法，步骤如下：采用Trizol一步法提取研磨肺组织总RNA并测定其浓度和纯度. 从GenBank下载内皮素1前体原(preproET1)的基因序列（NM001002 956）,使用PPrimer 5.0软件分析设计引物（TaKaRa公司合成）. preproET1的一对引物为：sense: 5′ATGGACCACTTGGAAAGCAG3′ anti