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更年期抑郁症与海马、皮质5-HTR1AmRNA相关性的实验研究_药学论文.docVIP

更年期抑郁症与海马、皮质5-HTR1AmRNA相关性的实验研究_药学论文.doc

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更年期抑郁症与海马、皮质5-HTR1AmRNA相关性的实验研究_药学论文 更年期抑郁症与海马、皮质5-HTR1AmRNA相关性的实验研究_药学论文 作者:刘艳玲1,宋卓敏,丁雨 【摘要】 目的从基因水平探讨更年期抑郁症与5-HT1A受体亚型转录水平的相关性及中医药干预作用。方法对雌性成年大鼠采用去势+孤养+改良的慢性不可预见应激建立更年期抑郁症模型;将去势大鼠随机分为更年期组、模型组、西药组(百优解联用雌激素)、中药组(一解合方),并以假手术组为对照。采用RT-PCR法测定海马、皮质神经元中5-HTR1A mRNA转录水平,应用GIS-2010凝胶图像分析系统照相、读取灰度值。比较分析各组之间的差异。结果模型组大鼠海马、皮质5-HTR1A mRNA转录水平低于假手术组,有显著性差异(0.01);中药组大鼠海马、皮质5-HTR1A mRNA转录水平显著高于模型组、西药组(0.01)。结论更年期抑郁症在基因水平的发生机理可能是由于5-HTR1AmRNA转录功能受到破坏,中药一解合方可通过影响海马、皮质突触后5-HTR1A mRNA转录水平而发挥治疗作用。5-HTR1A mRNA的转录水平可作为药物治疗新靶点,值得进一步研究。 【关键词】 更年期抑郁症; 5-HTR1A mRNA; 中医药; 一解合方  近年来,随着分子生物学的不断发展,5-羟色胺受体在抑郁症的发病学说中引起很大重视。突触间隙5-HT作为神经递质必须与其相应的受体结合方可进行信息传递。前期研究[1]显示5-HTR1A与更年期抑郁症发病密切相关,本实验拟从基因水平进一步探讨5-HTR1A mRNA在更年期抑郁症发病中的病理机制,以期寻找药物作用新靶点,为临床治疗提供新思路。   1 材料与仪器   1.1 动物与分组雌性Wistar清洁级大鼠50只,体质量(210±20)g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。   采用Open-Field法进行行为学测定后,将水平运动和垂直运动总得分≤30分或≥120 分、体质量≥230 g或≤190 g的大鼠,予以剔除,共选取 43 只评分及体质量相近的大鼠,按随机数字表法分为5组:①假手术组;②更年期组(去势);③更年期抑郁症模型组(去势+应激);④西药组(去势+应激+百优解联用雌激素);⑤中药组(去势+应激+一解合方)。其中假手术组和更年期组各8只,模型组、中药组、西药组各9只。   1.2 药品中药一解合方浸膏(药物组成:熟地30 g,北沙参20 g,麦门冬20 g,厚朴10 g,陈皮10 g,半夏15 g,茯神15 g,苏梗10 g,石菖蒲6 g,郁金10 g,砂仁6 g等),由天津中医药大学中医药研究研究院制剂室提供。西药:百优解(Eli Lilly and Company Limited,批号:A140885),用蒸馏水配成0.4 mg/ml混悬液,4℃保存,使用时充分摇匀。苯甲酸雌二醇注射液(天津金耀氨基酸生产有限公司,批号:0505111)。   1.3 仪器及试剂紫外分光光度计(BioPhotometer) (德国Eppendorf公司),台式高速冷冻离心机(3K18)(美国Sigma公司),PCR扩增仪(TH-48a)(杭州大和热磁有限公司),多功能电泳仪(北京六一仪器厂),全自动凝胶图像分析系统(上海天能科技公司)。   ImProm-Ⅱ反转录酶、dNTP、随机引物pd(N)6购自美国Promega公司;异硫氰酸胍、DEPC、和β-巯基乙醇等购自美国Simga公司;Taq DNA聚合酶、Tris碱、水饱和酚、超纯水和DNA分子量标准Marker等购自北京鼎国生物技术有限公司;其它生化试剂均为国产分析纯。   2 方法   2.1 造模方法各组大鼠常规喂养1周后,术前禁食24 h,第2天进行手术。①模型、中药、西药和更年期4组大鼠行卵巢摘除术,10%水合氯醛(300 mg/kg体质量)腹腔注射麻醉,背位固定,于下腹部正中切开,逐层进入腹腔,结扎并剪去其双侧卵巢。术后1周阴道涂片,连续5 d阴道监测未见动情周期证明去势成功。②假手术组大鼠模型 手术方法同卵巢摘除术类似,但不切除卵巢,仅结扎、并摘取卵巢附近少许脂肪组织。③对去势成功后的模型、中药、西药3组大鼠进行慢性不可预见性应激(参考文献[2]并加以改良)。将大鼠每笼1只饲养,并给予21d各种不同的应激,包括电击足底(强度5 mA,每隔20s刺激1次,持续30 min),冰水游泳(8℃,5 min),热应激(45℃,5 min),摇晃(1次/s,15 min),夹尾(1 min),禁水(24 h),禁食(48 h)和昼夜颠倒等刺激,上述8种刺激每天随机选取一种,每项刺激至少进行2次,同种刺激不连续进行。   2.2 给药方法于应激开始同步给药,采用灌胃方式

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