新城疫病毒体外诱导S180细胞凋亡的实验研究_医学论文.docVIP

新城疫病毒体外诱导S180细胞凋亡的实验研究_医学论文 新城疫病毒体外诱导S180细胞凋亡的实验研究_医学论文 作者：蒋丽娜 孙黎 程建贞 罗强 翟登高 【摘要】 目的：探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)体外对S180肉瘤细胞（简称S180）生长有无抑制和诱导细胞凋亡作用。方法:取培养至对数生长期的S180细胞浓度为5×104/mL和1×106/mL分别接种于96孔板和50mL培养瓶中，加入不同浓度的NDV(1∶20、1∶10、1∶5)作用24h，分别用MTT法检测NDV对S180瘤细胞的生长抑制作用,荧光显微镜和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：经上述不同浓度的NDV作用24h，对S180细胞生长的抑制率依次为10%、26%、39%，各实验组吸光度值（A490）与对照组比较差异均有统计学意义(0.05)。荧光显微镜观察实验组培养的S180瘤细胞，出现细胞核固缩及凋亡小体，琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带。结论：NDV对体外培养S180细胞增殖有明显抑制作用，可诱导S180细胞凋亡。 【关键词】 新城疫病毒；细胞凋亡电泳/琼脂凝胶 【ABSTRACT】 Objective:To investigate whether the Newcastle disease virus can inhibit proliferation of S180 cells and/or induce apoptosis of the cells in vitro.Methods:S180 cells（5×104/mL）were cultured at midL each.The cells were treated for 24 hours with different concentrations of Newcastle disease virus.Growth inhibition rate was measured by MTT method.Apoptosis was detected by the following ways:fluorescence microscopy with Annexin VFITC staining was used for observing the change of cell morphology，agarose electrophoresis was used to detect the DNA changes and observe substle disease virus were 10%,26%，39% under the Newcastle disease virus concentrations of 1∶20、1∶10、1∶5 respectively,with a significant difference to that of the control（t=3.606,0.05；t= 4.327，0.05；t=4.321,0.05）.Cell contraction and apoptotic bodies were observed under fluorescence microscope.DNA fragment was shown through agarose electrophoresis.Conclusion:Newcastle disease virus can inhibits proliferation and induces cell apoptosis in S180 cells in vitro. 【KEY WORDS】 Newcastle disease virus,Apoptosis,Electrophoresis/Ager Gel 肿瘤的发生不仅与细胞的过度增殖有关,而且与细胞凋亡受抑制从而使已转化的细胞生存期限延长有关。细胞凋亡具可诱导性,因此,诱导肿瘤细胞凋亡成为肿瘤治疗的一大热点[1]。近年来，关于NDV感染诱导肿瘤细胞凋亡报道比较多，而对于S180细胞凋亡的诱导作用报道较少。本实验研究了NDV体外感染S180细胞的影响，探讨NDV的抗肿瘤作用，旨在为更深入研究NDV抗肿瘤作用机制，为某些肿瘤的治疗提供依据[2]。 1 材料与方法 1.1 一般资料 1.1.1 病毒制备 新城疫病毒(NDV)弱毒株由中国预防医学科学院病毒学研究所提供，病毒按常规方法在鸡胚传代。取孵育9～11d的鸡胚，将效价为1∶800 以上的病毒液稀释100倍，取0.1mL注入尿囊腔内培养72h，取出鸡胚4℃冰箱过夜。次日收集尿囊液，按常规血凝实验方法检测血凝效价，NDV为1∶800（++），所有病毒存于-80℃备用。 1