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活血通脉灵对异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠VEGF、bFGF表达的影响_药学论文 活血通脉灵对异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠VEGF、bFGF表达的影响_药学论文 作者：杜英 淮丁华 杨艺全 商小涓 【摘要】 目的探讨活血通脉灵(HXTML)对异丙肾上腺素(ISO)所致心肌缺血大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法将50只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组，模型对照组，药物对照组及活血通脉灵大剂量治疗组(HXTMLmax)和活血通脉灵小剂量治疗组(HXTMLmin)，采用ISO 复制心肌缺血模型，ABC染色检测VEGF和bFGF表达量。结果空白对照组VEGF、bFGF少量表达，其余各组均有不同程度表达，表达量较空白组高。二者在HXTMLmax组表达量最高，HXTMLmin组次之，与模型组及药物对照组比较差异有统计学意义。结论活血通脉灵能促进缺血心肌表达VEGF，bFGF，有一定的促血管生成作用。 【关键词】 活血通脉灵; 心肌缺血; 异丙肾上腺素; 血管内皮生长因子; 碱性成纤维细胞生长因子 　冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)已成为威胁人类健康的最常见的疾病之一，心肌缺血是该病基本的病理生理过程。目前，对于本病的治疗方法主要有药物治疗、介入治疗、外科手术等，均有其优势和局限性，而促血管生成疗法也是当前一项研究热点，其内容主要为血管内皮生长因子(VEGF)或成纤维细胞生长因子(FGF)的蛋白治疗和基因治疗。传统的中医药学对于本病在病因病机和辨证治疗等方面也积累了丰富的经验。 　　中药方剂活血通脉灵(HXTML)是以传统气血理论为基础，经多年实践总结出来的具有防治冠心病心肌缺血作用的方剂。本研究采用免疫组织化学法，初步探讨活血通脉灵对异丙肾上腺素(ISO)所致心肌缺血大鼠心肌VEGF, bFGF表达的影响。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物选用Wistar雄性大鼠50只，体质量200～220 g，清洁级，购自河北省实验动物中心，动物合格证编号：DK0505-0027。在通风、温度、湿度适宜的动物室内常规饲养。 　　1.2 药物活血通脉灵(丹参、元胡、柴胡、枳壳、当归、赤芍、川芎、檀香)所需中药材均购自河北医科大学中医院，并由医院制剂室制成汤剂。大剂量组每毫升药液含生药4.7 g，小剂量组每毫升药液含生药2.35 g。盐酸异丙肾上腺素(ISO)注射液：上海禾丰制药有限公司生产，批号：5E20002，规格1 mg/2 ml;肠溶阿斯匹林，石家庄制药集团生产，批号：070617。 　　1.3 试剂VEGF鼠多克隆抗体，批号：11064;生物素标记羊抗小鼠IgG，批号bFGF兔多克隆抗体，批号：K1504;生物素标记羊抗兔IgG，批号DAB显色剂，批号以上试剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。 　　1.4 仪器电热恒温培养箱：HHB11360型，天津三水科学仪器有限公司产;LEICA切片机RM2125型，德国产;恒温式附贴切片展片仪ZHPY-型，河北医学院提供;双目生物摄影显微镜XSZ-HS型，日本产;高清晰度彩色病理图文分析系统HPIAS-1000型，同济医科大学千屏影象工程公司产。 　　2 方法 　　2.1 动物分组及给药方法采用随机数字表法，将50只Wistar大鼠分为5组，即空白对照组、模型对照组、药物对照组、活血通脉灵大剂量治疗组(HXTMLmax)和小剂量治疗组(HXTMLmin)，每组10只，先适应性喂养7 d。实验前用20%乌拉坦5 ml/kg腹腔注射麻醉后，记录肢体Ⅱ导联心电图，ST段接近等电位线，T波无低平或高耸者即可入选。空白组和模型组每次给予10 ml/kg的生理盐水，药物对照组给予肠溶阿斯匹林16.6 mg/kg，用生理盐水配制成等体积混悬液;活血通脉灵大剂量治疗组和小剂量治疗组分别给予含生药47，23.5 g/kg汤剂, 以上液体及药物的给药容积为10 ml/kg，1次/d，连续14 d。 　　2.2 复制模型方法参照文献[1]，自第12天灌胃后2 h，除空白对照组外，其余4组大鼠均皮下注射异丙肾上腺素5 mg/kg复制心肌缺血模型，空白对照组皮下注射等容积生理盐水，1次/d，连续3 d。 　　2.3 VEGF、bFGF免疫组化染色各组大鼠均在末次皮下注射后45 min取心尖部心肌组织，生理盐水冲洗，40 g·L-1甲醛固定24 h，常规石蜡包埋，制成4 μm切片，石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(pH=7.4)冲洗3次，每次3～5 min，每张切片加50 μl过氧化物酶阻断溶液，室温下孵育10 min;PBS冲洗3×5 min;加50 μl的非免疫性动物血清，室温下孵育5 min;分别加50 μl VE