白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶9表达的影响_药学论文.docVIP

白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶表达的影响_药学论文 白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶表达的影响_药学论文 作者：余海波, 潘承恩, 吴武军, 赵四海, 张慧峰 【摘要】 目的：观察白藜芦醇（resveratrol, Res）对体外人肝癌细胞系SMMC细胞增殖及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase）表达的影响，初步探讨Res抑制肝癌细胞侵袭转移的机制。方法：应用不同浓度的Res分别作用于人肝癌细胞系SMMC细胞24、48和72 h，采用甲基噻唑基四唑比色试验（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）观察Res对SMMC细胞增殖的影响；反转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT）检测MMP的表达；蛋白印迹分析（Western blot analysis）法检测MMP蛋白表达情况。结果：Res对SMMC细胞有增殖抑制作用，且呈量效和时效关系；经Res作用后，SMMC细胞MMP和蛋白表达均明显下降（P＜0.05）。结论：Res对肝癌细胞的生长具有抑制作用，且能下调其MMP的表达，可能具有抑制肝癌细胞侵袭转移的作用。 【关键词】 白藜芦醇; 肝癌; 基质金属蛋白酶 　　Objective: To observe the effects of resveratrol on proliferation of human hepatocellular carcinoma cell line SMMC9) in vitro. 　　Methods: SMMCression of MMP9 mRNA was determined by reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR). MMP9 protein was identified by Western blot analysis. 　　Results: Resveratrol could inhibit the proliferation of SMMC effects. Moreover, both MMP9 mRNA expression and MMP9 protein production were markedly reduced after resveratrol treatment. 　　Conclusion: Resveratrol can inhibit the proliferation of SMMCt resveratrol may suppress the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma. 　　Keywords: resveratrol; liver cancer; matrix metalloproteinase 　　原发性肝癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，术后5年生存率低，仅为25%～39%［1］。侵袭转移是影响肝癌预后的主要因素。因此，阐明肝癌侵袭转移的发生机制，寻求有效的抗侵袭转移治疗措施，对改善肝癌患者预后具有重要意义。白藜芦醇（resveratrol, Res）是一种从葡萄、虎杖等植物中分离提取的一种多酚类化合物。近年来的研究表明，Res有抗炎、抗氧化、改善微循环和调节脂质代谢等众多生物学活性。深入研究发现其具有抗肿瘤作用［2］，特别是对于肝癌细胞，Res有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用，但目前鲜有抑制肝癌侵袭转移的报道。本实验通过研究Res影响肝癌细胞生长和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase）表达的情况，初步探讨了Res抑制肝癌细胞侵袭转移的可能性。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　1.1.1 细胞株 人肝癌细胞株SMMC为西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科实验室传代保存，接种于含有10%新生牛血清、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的RPMI 1640培养液中，在37 ℃、5% CO2及完全饱和湿度条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。 　　1.1.2 试剂 Res购自美国Sigma公司；优级新生牛血清，购自兰州民海生物工程有限公司；RPMI 1640培养基，购自美国Gibco公司；逆转录试剂盒、PCRMix及蛋白marker购自Invitrogen公司；鼠抗人MMP抗体购自美国Neomarker公司，羊抗鼠二抗购自深圳晶美公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 甲基噻唑基四唑比色试验 取对数生长状态良好的SMMC细胞，制备细胞悬液，调整细胞浓度后加入96孔板，使每孔细胞数达到5×103，培养24