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白血病细胞可变铁池的检测及其意义_医学论文 白血病细胞可变铁池的检测及其意义_医学论文 作者：贾国存，高举，廖清奎，李丰益，袁粒星，何斌【摘要】 为了研究细胞可变铁池(labile iron pool，LIP)的检测方法，用不同浓度的去铁胺（DFO）与K562及HL- 60细胞共同培养0、6、12、24、48小时，用钙荧光素（caicein）负荷K562及HL- 60细胞，荧光分辨仪检测细胞荧光量；用快速铁螯合剂螯合铁，使恢复荧光，然后计算2次荧光差值。结果表明： 浓度为50和100 μmol/L 的DFO作用于K562及HL- 60细胞12小时后，荧光值明显高于对照组（0.05），且LIP的荧光差值（ΔLIP）随DFO作用时间的延长及浓度增加而降低，即呈一定的时间及剂量依赖性。 结论： DFO通过螯合细胞内铁 降低了白血病细胞LIP； calcein AM荧光可作为检测细胞LIP变化的比较可靠的方法。 【关键词】 铁 　　Detection of the Labile Iron Pool in Leukemia Cells and Its Significance 　　Abstract To explore a rapid and easy method to detect labile iron of pool (LIP) in cells，HL- 60 and K562 cells were cultured at a concentration 1×106/ml in RPMI 1640 containing 10% heat- inactivated fetal bovine serum. The iron deprivation was induced by adding desferrioxamine (DFO) 10-100 μmol/L for 0-48 hours. The intracellular LIP was measured by probe calcein-AM. Calcein fluorescence was monitored in 1420 multilabel counter. The results indicated that when HL- 60 and K562 cells were incubated with different concentrations of DFO，the calcein fluorescence intensity was higher than that of control group at 12，24 and 48 hours (0.05). Fluorescence value of representing LIP in DFO groups was lower than that in the control group. In conclusion，DFO can decrease LIP in leukemia cells. The approach used in this study may provide a simple and reliable method for detection of intracellular iron homeostasis. 　　Key words iron desferrioxamine K562 HL- 60 铁是细胞维持正常功能活动所必需的元素，但过多的铁又可损伤细胞。细胞铁水平受铁代谢相关蛋白（转铁蛋白-转铁蛋白受体，铁蛋白）的共同调节而维持平衡，其调节机制与胞浆铁调节蛋白与铁反应元件的结合有关。虽然细胞内铁有不同的结合形式和不同的配体，但目前认为能够反映细胞铁状态和能够被铁调节蛋白感受的铁是胞浆中结合力较弱、分子量较小的那部分铁，即可变铁池（labile iron pool，LIP）［1］。然而，过去一直缺少比较可靠的直接检测细胞LIP的方法。新近我们应用一种荧光探针标记的方法检测活细胞LIP，观察在铁螯合的状态下细胞LIP的变化，现报告如下。 　　材料和方法 　　材料 　　细胞株 　　人白血病细胞株K562为本实验室保存株；HL- 60细胞引自四川大学基础与法医学院细胞分子生物学实验室。 　　主要试剂及仪器 　　钙荧光素乙酰氧基甲酯(calcein acetoxymethyl ester，calcein AM)（Sigma公司产品），BIP（2，2-Bipyridine，Sigma产品）；去铁胺（desferrioxamine，DFO瑞士产品)，RPMI 1640培养液（Gibco产品），特级新生牛血清 （Hyclone公司产品）；HEPES（Boehringer Mann