益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠缺氧诱导因子-1α 和血管内皮细胞生长因子的影响_医学论文.docVIP

益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠缺氧诱导因子-1α 和血管内皮细胞生长因子的影响_医学论文 益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠缺氧诱导因子-1α 和血管内皮细胞生长因子的影响_医学论文 作者：阙华发，朱元颖，王云飞，张臻，徐杰男，邢捷，唐汉钧 【摘要】 探讨益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α， HIF-1α）和血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）的影响。方法:72只清洁级雄性SD大鼠，除8只作正常对照组外，其他大鼠在背部全层皮肤缺损开放性创面的基础上加造气虚血瘀证糖尿病模型后，随机分为模型组、贝复济组、益气化瘀组、益气组和化瘀组。应用免疫组织化学、图像分析等技术，观察各组大鼠创面肉芽组织中HIF-1α和VEGF水平的变化。结果:模型组HIF-1α水平高于正常对照组（ P lt0.01），VEGF浓度明显低于正常对照组（ P lt0.01）。各用药组HIF-1α表达水平明显低于模型组（ P lt0.01），VEGF表达水平明显高于模型组（ P lt0.01）。益气化瘀组HIF-1α表达水平明显低于贝复济组、益气组和化瘀组（ P lt0.05或 P lt0.01），VEGF表达水平明显高于贝复济组（ P lt0.01）。益气组与化瘀组HIF-1α和VEGF的表达水平相似，它们与贝复济组之间无明显差异。结论:益气化瘀中药能明显促进糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠的创面愈合，其机制与下调HIF-1α水平、上调VEGF的表达水平和改善局部缺血缺氧状态有关。 【关键词】 糖尿病 　　我们在长期的临床实践中发现，益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡有显著的疗效［1］。为进一步探讨益气化瘀中药促进创面愈合的作用机制，开展了以下研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 72只雄性SD大鼠，清洁级，2月龄，体质量200～250 g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。动物合格证号:医动字第02-22-2号。 　　1.2 药物 益气化瘀方由生黄芪、太子参、桃仁和地龙组成，剂量比例为2.5∶2.5∶1∶1。大鼠给药剂量为11.61 g/（kg·d），减压浓缩至含生药 2.5 g/ml 拆方益气方由生黄芪和太子参组成，剂量比例为1∶1，大鼠给药剂量为6.75 g/（kg·d），减压浓缩至含生药1.5 g/ml拆方化瘀方由桃仁和地龙组成，剂量比例为1∶1，大鼠给药剂量为 4.86 g/（kg·d）， 减压浓缩至含生药1.0 g/ml。以上中药均由上海中医药大学龙华医院制剂室按水煎醇沉工艺制备，4 ℃冰箱保存备用。碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor， bFGF）贝复济，珠海东大生物制药有限公司产品。批号:国药准字 　　 　　1.3 主要实验试剂 免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法（streptavidin-biotin per-oxidase method， S-P）试剂盒，美国Zymed公司产品EnVision试剂（HRP/Rabbit）即用型，丹麦Da-ko公司产品缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α， HIF-1α）、血管内皮细胞生长因子（vascu-lar endothelial growth factor， VEGF）一抗（兔抗鼠，分别1∶100、1∶50稀释），美国Santa Cruz公司产品生物素标记的羊抗兔抗体，Vector公司产品辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase， HRP）标记山羊抗小鼠抗体，北京中山生物技术有限公司产品。 　　1.4 主要实验仪器 IMS细胞图像分析系统和医学图像分析软件，上海申腾信息技术有限公司产品 摄像机（型号:MV-CP410），Panasonic公司产品显微镜，Olympus公司产品BH2数码相机，Nikon公司产品。 　　1.5 糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠模型的建立 给大鼠喂饲高脂饲料（4%胆固醇，10%猪油， 0.2% 甲基硫氧嘧啶，0.5%胆酸钠，85.3%基础饲料）10 d后，以pH 4.6，0.1 mmol/L的枸橼酸钠缓冲液溶解链脲佐菌素（streptozotocin， STZ），配成1%溶液，以60 mg/kg的剂量连续腹腔内注射STZ溶液2 d，72 h后动物血糖浓度大于16.7 mmol/L及尿糖为（++++）时，即成糖尿病气虚血瘀证大鼠模型。将大鼠用盐酸氯胺酮（100 mg/kg）腹腔注射麻醉后，造模区（腰椎正中偏上）剪毛，用直径 15 mm 的图章标记造模面积，在无菌条件下，沿脊椎方向用外科方法作