知柏地黄丸对瘦素诱导特发性性早熟模型小鼠的影响_药学论文.docVIP

知柏地黄丸对瘦素诱导特发性性早熟模型小鼠的影响_药学论文 知柏地黄丸对瘦素诱导特发性性早熟模型小鼠的影响_药学论文 作者：刘孟渊， 徐雯， 肖柳英， 韩超 【摘要】 【目的】观察知柏地黄丸对瘦素（Leptin）诱导的特发性中枢性性早熟（ICPP）模型小鼠的影响。【方法】选用18日龄BALB/c雌性小鼠，随机分为6组：正常对照组，ICPP模型组，知柏地黄丸高、低剂量组（剂量分别为101.4、50.7g·kg-1·d-1)，甲地孕酮对照组（剂量为3.9mg·kg-1·d-1），促性腺激素释放激素类似物（GnRHA）组（首次剂量为1 573.5μg/kg，第2、3次剂量均为1 180 μg/kg,隔日1次；除正常对照组外，其他各组均腹腔注射Leptin(20mg/kg)复制模型；检测各组小鼠阴道开口数，体质量，子宫、卵巢质量及血清黄体生成素（LH），雌二醇（E2）含量，并计算子宫与卵巢指数。【结果】知柏地黄丸高剂量组于造模第4～6天对leptin所致阴道开口提前有抑制作用（均P＜0.05或P＜0.01）；知柏地黄丸低剂量组可降低模型小鼠的子宫质量，抑制Leptin所致子宫指数与卵巢指数升高（均P＜0.05或P＜0.01）；知柏地黄丸高、低剂量组可降低模型小鼠的LH水平（均P＜0.01），但对模型小鼠的体质量及血清E2水平无显著影响（均P＞0.05）。【结论】知柏地黄丸治疗ICPP的作用可能与其能抑制下丘脑—垂体—性腺轴的提前发动有关。 【关键词】 知柏地黄丸/药理学； 性早熟/中药疗法； 黄体生成素/血液； 雌二醇/血液； 疾病模型，动物； 小鼠 性早熟是一种生长发育异常，表现为青春期特征提前出现。性早熟以女童为多见，其中特发性中枢性性早熟（ICPP）占女孩性早熟的80%～90%，男童性早熟的40%，ICPP的发病机理尚未完全清楚，可能系下丘脑—垂体—性腺轴（HPGA）功能的提前发动所致。由于其确切原因未明，因而无法复制出理想的ICPP动物模型。一般认为青春期的发动需要一定体质量和体脂的积累，瘦素（Leptin）可能涉及获得临界体脂总量的神经内分泌通道的信号作用，这可能是青春期启动的一个允许因子［1］。本实验拟采用Leptin刺激未成熟雌性BALB/c小鼠诱导ICPP动物模型，观察知柏地黄丸对抗ICPP的作用，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 动物 选用18日龄BALB/c雌性小鼠61只，由中国医学科学院上海实验动物中心提供（合格证号：中科动管会第001号），常规分笼饲养，自然照明，随意取食和饮水。 1.2 主要药物、试剂与仪器 知柏地黄丸由知母、黄柏、熟地黄、山萸肉、牡丹皮、淮山药、茯苓、泽泻等中药组成，所有灌胃中药均选用购自广东一方药厂生产的颗粒剂，用蒸馏水溶解，密封蒸浴加热消毒；醋酸甲地孕酮片由上海信谊康捷药业有限公司生产，批号：030101；抑那通针剂由日本武田药品工业株式会社生产，批号：368；Leptin购自Pepro Tech公司；雌二醇（E2）、黄体生成素（LH）检测试剂盒购自DR lab.California USA；Mettler Toledo 电子天平（1/1000）；贝克曼GS台式冷冻高速离心机；Clinic Bio 128C酶标仪。 1.3 动物分组、造模［2］与给药 选用18 日龄BALB/c雌性小鼠61只，常规分笼饲养，自然照明，随意取食和饮水。19 日龄时称体质量，随机分为6组；正常对照组，ICPP模型组，知柏地黄丸高、低剂量组，甲地孕酮对照组，促性腺激素释放激素类似物（GnRH）组；20日龄时开始造模给药。正常对照组给予生理盐水腹腔注射（i.p），同时给予蒸馏水灌胃（i.g）；其他各组均腹腔注射Leptin(2mg/kg)复制模型，同时，知柏地黄丸高、低剂量组分别给予101.4、50.7g·kg-1·d-1剂量的知柏地黄丸药液i.g，甲地孕酮对照组给予甲地孕酮药液（剂量为3.9mg·kg-1·d-1)，均为上午给药，连续7d；此外，GnRH组给予GnRH制剂即注射用醋酸亮丙瑞林（商品名抑那通），在造模同时以抑那通于右后肢处肌注，隔日1次，首次给药剂量为1 573.5μg/kg，第2、3次给药剂量为1 180 μg/kg，共给药3次。 1.4 观察指标及方法 1.4.1 阴道开口 据预试验观察正常BALB/c雌性小鼠阴道开口时间一般在日龄26～28d，以27d较为集中。本实验于造模后第3天（即22日龄）开始每天下午4点观察各组阴道开口，26日龄时结束。 1.4.2 体质量变化 每天记录各组小鼠体质量变化，实验结束时，取前后体质量进行比较。 1.4.3 血清黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）含量测定 实验结束时，各组动物称体质量后，摘取眼球眼眶取血，3 500r/min、4℃离心