短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白体内外对凝血功能的影响_药学论文.docVIP

短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白体内外对凝血功能的影响_药学论文 短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白体内外对凝血功能的影响_药学论文 作者：黎渊弘 钟小斌， 林发全, 李明芬, 黎肇炎 【摘要】 目的研究短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白体内外的抗凝作用及机制。方法按试剂盒说明进行磷脂结合抗凝蛋白对活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT) 、凝血酶时间(TT) 、纤维蛋白原（FIB）含量、凝血因子活性、组织凝血活酶抑制实验(TTI)和稀释的罗氏蝰蛇毒时间(DRVVT)、血小板聚集功能以及溶血、出血实验。结果磷脂结合抗凝蛋白能显著地延长活化部分凝血活酶时间和稀释的罗氏蝰蛇毒时间，减少组织凝血活酶抑制实验(TTI)试剂的磷脂浓度,能加速其抗凝作用,干扰Ⅷ，Ⅸ，Ⅺ，Ⅻ因子活性，未见溶血和出血。其抗凝活性与磷脂结合有关，可能通过内源性途径抑制凝血过程。结论短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白能够抗凝、抑制Ⅷ，Ⅸ，Ⅺ，Ⅻ因子活性并与磷脂结合，可通过内源性途径抑制凝血过程。 【关键词】 抗凝血； 磷酯； 蛇毒 Abstract:ObjectiveTo study anticoagulation effects of Phospholipid-binding anticoagulation protein(PBAP) from Agkistrodon halys Brevicaudus Venom. MethodsThe activated partial thromboplastin time(APTT),Prothrombin time(PT),Fibrinogen (FIB),Thrombin time(TT) and Factor activity were determined by kit illustration. The TTI test was peformed according to the method of Schleider .The dRVVT test was done in quadruplicate using commercial kits acoording to the manufacturers iustrution.ResultsComored with conred group,the Phospholipid-binding anticoagulation protein(PBAP) from Agkistrodon halys Brevicaudus Venom could markedly prolong APTT and DRVVT(0.01) concentration-dependent but time-independent manner, accentuate the inhibitor effect of TTⅠby decreasing phospholipid concentration.and inhibit the activities of FⅧ：C，FⅨ:C，FⅪ:C，FⅫ:C.ConclusionThe Phospholipid-binding anticoagulation protein from the Agkistrodon halys Brevicaudus Venom can anticoagulate and inhibit FⅧ:C，FⅨ:C，FⅪ:C，FⅫ:C activity and bind Phospholipid. Key words:Anticoagulation； Phospholipid ; Snake venom 蛇毒中常有的抗凝蛋白分为蛋白水解酶类和非蛋白水解酶,它们作用的有效成分和性质已被广泛研究。然而，蛇毒中磷酯结合抗凝蛋白（Phospholipid-binding anticoagulation protein，PBAP)对凝血功能的作用尚未见报道。笔者已报道从短尾蝮蛇毒中纯化出一种能与磷酯结合的新型抗凝蛋白［1］。该蛋白是二聚体,相对分子量为24.0 ×103(非还原)和14.6×103(还原)。等电点为pH 5.2。N-末端为DCPS(D/G)WSSYEGHCY(Q/K)。它具有精氨酸酯酶活性,而没有磷酯酶A﹑5﹣核苷酸酶﹑纤维蛋白（原）溶解酶﹑磷酸二酯酶﹑L﹣氨基酸氧化酶和类凝血酶的活性。本文将抗凝蛋白体内外对凝血功能的作用报道如下。 1 器材 电泳纯的短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白，由广西医科大学蛇毒研究所纯化和提供; 活化的部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、纤维蛋白原（FIB）测定试剂盒，为美国Instrumentation Laboratory公司产品；因子Ⅱ，Ⅶ，Ⅷ，Ⅸ，Ⅹ，Ⅺ