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石斛属植物遗传多样性的简单重复间系列分析_药学论文 石斛属植物遗传多样性的简单重复间系列分析_药学论文 【摘要】 　　目的研究我国石斛属植物间的亲缘关系。方法从55个ISSR引物中筛选出14个多态性好的引物对石斛属（Dendrobium）植物基因组DNA进行简单重复间序列（ISSR）分析。利用POPGENE32软件计算ISSR扩增产物的Neis基因多样性指数（H）和Shannon信息指数（I），标记系统的有效等位基因数(effective number of alleles, NE)。应用NTSYS（3.0）软件计算Neis遗传距离和遗传相似系数。按照非加权平均距离法(UPGMA)构建聚类关系图。结果14条引物共扩增出123条带，多态性带112条，约占总数的91.06%，平均每个引物扩增的DNA带数为8.79条。Neis基因多样性指数（H）为0.351 9，Shannon信息指数（I）为0.528 2，有效等位基因数（NE）为1.594 5，种间的相似系数介于0.090 9～0.695 7，平均为0.377 9。结论我国石斛品种的遗传基础比较丰富，ISSR分子标记构建的亲缘关系树状图与经典分类系统基本一致。 【关键词】 石斛； 简单重复间序列； 遗传多样性 　　Abstract：ObjectiveTo probe the relationship among Dendrobium species (Orchidaceae). Methods14 primers with good polymorphism screened from 55 ISSR primers were used to conduct ISSR analysis and dimorphic data of DNA fragments were used to construct the dendrogram by UPGMA.ResultsTotally 123 bands were amplified and 112 of them were polymorphic accounting for 91.06%. The average number of DNA bands amplified by each primer was 8.79. Neis gene diversity (H), Shannons information index (I) and effective number of alleles(NE) were 0.351 9, 0.528 2 and 1.594 5, respectively. The genetic similarity among all the tested clonal cultivars ranged from 0.090 9 to 0.695 7, averaging 0.377 9, which indicated that the genetic basis was relatively rich. ConclusionClustering results revealed that the dendrogram constructed with ISSR molecular makers was identical with the classic taxonomic system. 　　Key words：Dendrobium; ISSR; Genetic diversity 　　石斛（Dendrobium Sw.）是我国传统贵重中药材，药用历史悠久，具有滋阴养胃、生津止渴的功效。分布于亚洲热带、亚热带地区和太平洋岛屿，我国有74个种和2个变种，主要分布于秦岭淮河以南诸省［1］，已被国家列为濒危灭绝的植物药材之一。石斛种质资源丰富，来源和学名比较混乱［2］，同属植物作石斛入药的种类复杂，不同来源的石斛在化学成分、含量及药理活性等方面有一定差异［3］，同时人们对石斛属种质资源种的分类和演化等方面的研究较少，这都阻碍了石斛种质资源的合理挖掘利用。我们应用简单重复间序列（inter-simple sequence repeat, ISSR）标记技术对28种石斛进行分析，以确定它们之间的遗传差异和种间亲缘关系，为石斛属植物系统学研究、种质资源的保护和利用提供科学依据与参考。 　　1 器材与方法 　　1.1 材料 实验所用石斛植物采自我国石斛主产区：云南、安徽、广东、贵州等省区的原始森林，现被整丛栽种于山东理工大学生命科学学院植物组织培养实验室，以便及时取材和观察（见表1），实验样品经开花鉴定。 　　1.2 仪器与试剂 PCR仪（PTC-200, MJ Research, Inc, USA)；电泳