益气养阴散结方含药血清及对Ａ５４９ 细胞凋亡生成素基因表达影响的实验研究_药学论文.docVIP

益气养阴散结方含药血清及对Ａ５４９ 细胞凋亡生成素基因表达影响的实验研究_药学论文 益气养阴散结方含药血清及对Ａ５４９ 细胞凋亡生成素基因表达影响的实验研究_药学论文 【摘要】 　　目的探讨益气养阴散结方含药血清对人肺癌Ａ５４９ 细胞凋亡及生存素（Ｓｕｒｖｉｖｉｎ）基因表达的影响。方法根据实验动物学原理制备大鼠含药血清和正常血清，设含药血清组和空白血清组，应用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ 染色法检测益气养阴散结方含药血清对人肺癌Ａ５４９ 细胞凋亡率的影响，观察凋亡细胞形态学变化，并用逆转录ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ －ＰＣＲ，ＲＴ －ＰＣＲ）法检测其对Ｓｕｒｖｉｎｉｎ 基因表达的影响。结果与对照组比较，药物组Ａ５４９ 细胞的凋亡率显著增高（P＜０．０１），Ｓｕｒｖｉｎｉｎ ｍＲＮＡ 的表达显著下降（P＜０．０５）。结论益气养阴散结方含药血清能明显促进Ａ５４９ 细胞的凋亡，下调凋亡相关基因Ｓｕｒｖｉｎｉｎ 的表达。 【关键词】 益气养阴散结方 肺肿瘤 细胞凋亡 生存素 　　Abstract：ObjectiveＴｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｙｉｑｉ Ｙａｎｇｙｉｎ Ｓａｎｊｉｅ Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ （ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ ａｓ ＹＹＳＰ）（ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｓｅｒｕｍ） ｏｎ ａｐｏｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｓｕｒｖｉｖｉｎ ｏｆ Ａ５４９ ｃｅｌｌｓ．MethodsＹＹＳＰ waｓ administrated ｇａｓｔｒｉｃ ｇａｖａｇｅ ｔｏ ｎｏrｍａｌ ｒａｔｓ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＹＹＳＰ， ｗｈｉｃｈ waｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｔｈｅ ｒａｔ ｓｅｒｕｍ ｗｉｔｈｏｕｔ ＹＹＳＰ waｓ ｔａｋｅｎ ａｓ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＹＹＳＰ ｏｎ ｔｈｅ ａｐｏｔｏｓｉｓ ｏｆ Ａ５４９ ｃｅｌｌｓ waｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ ／ＰＩ； ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｔ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｕｒｖｉｖｉｎ ｍＲＮＡ waｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＲＴ －ＰＣＲ.ResultsＣｏｍｐａｒed ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ， ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ａｐｏｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｍｅｄｉｃｉｎｅ increased ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（P ＜０．０１），ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｕｒｖｉｖｉｎ ｍＲＮＡ decreased ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（P ＜０．０５）．ConclusionＳｅｒｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＹＹＳＰ ｃａｎ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｎｄｕｃｅ ａｐｏｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖｉｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａ ５４９ ｃｅｌｌｓ． 　　Key words：Ｙｉｑｉ Ｙａｎｇｙｉｎ Ｓａｎｊｉｅ Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ； Lｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ； Ａｐｏｔｏｓｉｓ； Ｓｕｒｖｉｖｉｎ 　　原发性支气管肺癌是指原发于支气管黏膜和肺泡的癌症，是最常见的恶性肿瘤之一，预计到２０２５ 年，每年将有９０ 万人死于肺癌，中国将成为肺癌患病率第一大国［１］ 。近年来，中药在肿瘤临床治疗中的作用引起了医学界的瞩目，合理开发和运用中医药的抗肿瘤作用成为研究的热点。 　　益气养阴散结方是笔者导师湖北中医学院成肇智教授治疗肺癌的临床验方。为了进一步揭示其抗肿瘤的具体机制，本实验采用血清药理学方法，从细胞水平探讨益气养阴散结方对人肺癌Ａ５４９ 细胞凋亡及相关基因生存素（Ｓｕｒｖｉvｉｎ）表达的影响。 　　１ 　材料与方法 　　１．１ 　细胞与细胞培养人肺癌Ａ５４９ 细胞由武汉大学生命科学院惠赠。接种于ＲＰＭＩ １６４０ 完全培养液（含１０％胎牛血清，１００Ｕ／ｍｌ 青霉素，１００Ｕ／ｍｌ 链霉素）中，５％ＣＯ２，３７℃温箱中培养，２ ～３ ｄ 更换一次培养液，细胞长满后０．２５％胰酶消化、传代。 　　１．２ 　含药血清的制备益气养阴散结方由生黄芪、南沙参、莪术等组成，均购自湖北中医学院附属医院门诊部，传统方法煎制，浓缩为１ ｍｇ／ｍｌ。根据实验动物学原理以１０ ｍｌ／ｋｇ 给大鼠灌胃，２次／ｄ，连续３ ｄ，于末次给药后１ ｈ，经右心室取血，通过离心取得含药血清［２］ ；同样的方法生理盐水灌胃后取得空白血清，均置于－２０℃保存备用。 　　１．３ 试剂胎牛血清、ＲＰＭＩ １６４０ 培养液购自ＧＩＢＣＯ 公司； Ａｎｎｅｘｉ