生物制药提纲(济大).docVIP

1、基因工程生产药品的优点？ a. 可大量生产过去难以获得的生理活性多肽和蛋白质，为临床使用提供有效的保障； b. 可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理生化性质和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围； c. 利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质； d. 内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程进行改造； e. 利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 5、以大肠杆菌作为药物表达系统，会有哪些优点和不足？ 1）发展最早、应用最广泛的经典的表达系统。 2）大量外源基因能超量的表达，部分药物上市。 3）具有遗传背景清楚、目标基因表达水平高（高达70%），培养周期短，抗污染能力强。 4）不用于加工修饰化（糖基化、酰胺化）蛋白表达。 5）细胞死亡后，细胞壁脂多糖游离出来，形成内毒素，具有抗原性，产生热源。 6）N端增加的蛋氨酸也容易引起免疫反应。 6、在工业发酵和科研中通常采取哪些措施缩短延滞期？ ①通过遗传学方法改变种的遗传特性使迟缓期缩短； ②利用对数生长期的细胞作为“种子”； ③尽量使接种前后所使用的培养基组成不要相差太大； ④适当扩大接种量等方式缩短迟缓期，克服不良的响 9、包含体如何分离纯化？ 1）、细胞破碎效率较重要（溶菌酶处理—高压匀浆）2）、固-液相分离（离心）3）、去污剂或/和低浓度尿素或盐酸胍洗涤，去可溶性蛋白和膜蛋白4）、高浓度尿素或盐酸胍溶解包含体，可添加 DTT 打开二硫键5）、逐步透析或稀释去除变性剂 10、基因工程药物有什么特点？其分离纯化的一般流程如何进行? 1) 目的产物在初始物料中的含量较低; (2) 含目的产物的初始物料组成复杂,除了目的产物外,还有大量的细胞、代谢、残留培养基、无机盐等，特别是产物类似物对目的产物的分离纯化影响很大； (3) 目的产物的稳定性差，具有生物活性的物质对pH、温度、金属离子、 有机溶剂、剪切力、表面张力等十分敏感，容易使其失活、变性； 种类繁多，结构不一，性质各异 应用面广，对其质量、纯度要求高，甚至要求无菌、无热源。 流程 发酵液——细胞分离——a胞外产物(b胞内产物-细胞破碎-固液分离)——a细胞碎片分离(b包含体-变性-复性)——浓缩——初步分离——高度纯化——制剂——产品 11、宿主细胞的基本要求： ① 容易获得较高浓度的细胞；② 能利用易得廉价原料；③ 不致病、不产生内毒素；④ 发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；⑤ 容易进行代谢调控；⑥ 容易进行DNA技术操作；⑦ 产物的产量、产率高，且易提取纯化。 1、动物细胞培养基中加入小牛血清的作用？ ⑴提供生长因子和激素：胰岛素、表皮生长因子、皮质醇、雌二醇等 ⑵提供贴附因子和伸展因子：胶原、纤维结合蛋白、软骨素等 ⑶提供结合蛋白（识别金属、激素维生素和脂质带入细胞或消除其毒性） ⑷提供必需脂肪酸和微量元素磷脂质、胆固醇和前列腺素E。铜、锌、钴、钼、硒等。 ⑸PH缓冲系统 2、无血清培养基有哪些优点？ ①提高了细胞培养的可重复性，避免了由于血清批次之间差异的影响②减少了由于血清带来的病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险③供应充足稳定④产品易纯化⑤避免血清因素对细胞的毒性⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰 5、包埋和微囊培养的优点？ 1、包埋或包裹在载体或者微囊内的细胞可以获得保护，避免了剪切力的损害。 2、可以获得较高的细胞密度。 3、当控制在微囊膜的孔径后，可使产品浓缩在微囊内，从而有利于下游产物的纯化。 4、可使用多种生物反应器进行大规模培养。 1、固定化酶有哪些优缺点？ 优点： ①可以重复使用，酶的稳定性提高；②酶与底物和产物易于分开，易于纯化，产品质量高；③反应条件易于控制； ④酶的利用效率高，单位酶催化的底物量增加，用酶量减少；⑤比水溶性酶更适合于多酶反应。 缺点： ①固定化时，酶活力有损失②增加生产的成本③只能用于可溶性底物，而且较适于小分子底物，对大分子底物不适宜。 3、目前有哪些医药用酶，它们各有什么作用？ ①蛋白酶，主要用于消化不良和食欲不振等。②溶菌酶，具有抗茵、消炎、镇痛等作用。③超氧化物歧化酶，具有抗辐射作用。④L-天冬酰胺酶，用于治疗白血病。⑤尿激酶，具有溶血栓的活性。⑥其他相关酶制剂，如细胞色素c等。 3.抗体药物发展面临哪两大问题，该如何解决？ a.免疫原性 降低单克隆抗体的免疫原性，人体免疫系统对鼠源蛋白的排斥反应，抗体人源化是解决问题的唯一途径。 b.分子量大 降低单克隆抗体的分子量，增加组织通透性。 2.HAT培养基进行杂交瘤细胞筛选的原理？ 单克隆抗体技术中人工诱导小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合后，细胞将以多种形式出现，如脾细胞-瘤细胞、脾细胞-脾细胞、瘤细胞-瘤细