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转基因动物 获取外源目的基因 外源目的基因导入生殖细胞或胚胎干细胞 选择携带目的基因的细胞，选择体外培养系统和宿主动物 转基因胚胎的发育及鉴定 筛选所得的转基因动物 转基因动物技术路线 经典的技术路线? 目的基因 显微注射?已交配的 取出 移植 受体动物 妊娠供体动物 受精卵 输卵管 转基因动物 缺点：注入目的基因的命中率低，目的基因的整合率低，受精卵移植的受孕率低。 ?整合胚胎移植的技术路线 转基因动物 受体动物子宫  目的基因 非手术 胚胎移植? 体外受精 体外培养 多细胞胚胎 检测 整合外源基因卵子 受精卵 或囊胚 的胚胎精子优点：受精卵的成活率高达90％以上，外源基因整合率高，提高受孕率。 核移植（克隆）的技术路线 目的基因 转基因动物? 导入? 动物胎儿成纤维细胞 妊娠  取核?动物 去核 重组的 体外培养 囊胚期 胚胎移植 卵细胞 受精卵 胚胎 受体动物子宫? 特点：体细胞核移植；核移植前导入目的基因。 整合卵受精的技术路线：? 目的基因 转基因动物  导入  逆转录病毒 妊娠  精子 感染  体外受精 胚胎移植  卵母细胞 成熟卵细胞 囊胚 受体动物子宫 ?特点：卵母细胞导入目的基因后再与精子受精。 目的基因的制备和转基因的方法 目的基因的制备·目的基因的获得 逆转录合成法 化学合成法 PCR扩增法·目的基因的扩增 通过载体在宿主中克隆 通过PCR扩增目的基因 转基因动物的方法 · 显微注射法 · 生殖细胞载体法 · 胚胎干细胞法 · 病毒载体法 ??转基因动物的应用研究 改良动物转移单个基因改良动物性状，未见成功报道，尚需对性状表现的生化代谢途径，有关基因相互作用及基因定位整合，基因定量表达、组织特异性表达等进行深入研究。 乳腺生物反应器1987年，首次小鼠乳腺中表达组织型纤溶酶原激活剂 tPA蛋白。至今国际上转基因羊、转基因牛等的成功报道实例已有10多种，生产出抗胰蛋白酶、乳铁蛋白、人凝血蛋白因子Ⅷ、蛋白质C等药用蛋白。国外经济学家预期，10年后，转基因动物生产的药物销售额超过250亿美元。 基因药物生产 第一阶段是细菌基因工程 第二阶段是动物细胞基因工程 第三阶段是转基因动物—乳腺生物反应器。 特点：⑴乳腺是自我封闭系统，乳腺表达蛋