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第六章：分子生物学研究方法（下） －基因功能研究技术 一、基因表达研究技术 1. 基因表达系列分析技术（Serial Analysis of Gene Expression，SAGE） 是以DNA序列测定为基础分析全基因组表达模式的技术。 方法: 以9~11bp作为标签（tag）＝49＝262144组合 串联tag并通过两端接头PCR扩增 扩增产物进行测序 每个tag通过Genebank或EST数据库进行比对 确认tag代表的基因表达情况 2. RNA的选择性剪接技术 RNA的选择性剪接是指用不同的剪接方式从一个mRNA前体产生不同的mRNA剪接异构体的过程。 常用RT-PCR法研究某个基因是否存在选择性剪切。 3.原位杂交技术( In Situ Hybridization，ISH) 用标记的核酸探针，在组织、细胞上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手 段。 探针标记用同位素或地高辛、生物素荧光标记等。 4. 基因定点突变技术 通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列，用于研究某个（些）氨 基酸残基对蛋白质结构功能的影响。 二、基因敲除技术 基因敲除（gene knock-out）又称基因打靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造。 三、蛋白质与RNA、DNA相互作用 1. 酵母单杂交系统 将待测转录因子cDNA与表达载体导入酵母细胞，该基因产物如 果能够与顺式作用元件相结合，就能激活启动子，使报告基因得到表达。 2.凝胶阻滞试验 是用于研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。 当DNA与蛋白质结合时，在电泳中会受到阻滞，说明可能与某种特殊蛋白结合了。 3. DNAase足迹试验 蛋白质结合在DNA片段上，能保护结合部位不被DNAase水解，电泳中对应于结合部位没有条带。 * 一、基因表达研究技术 二、基因敲除技术 三、蛋白质与RNA、DNA相互作用 地高辛标记 同位素标记 染色体原位杂交 人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交 是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，表达产物非常容易被鉴定。 2008年的诺贝尔化学奖授予了日本下村修、美国马丁?查尔菲，以及美国华裔钱永健。他们三人在发现和研究绿色荧光蛋白(GFP)方面有突出成就。 *
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