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第四章 DNA的生物合成 DNA复制的特点 1、半保留复制 2、复制的起始，方向与速度 3、半不连续复制 4、DNA聚合酶催化，多种蛋白质参与 一、 半保留复制 P514 半保留复制——DNA在复制时，以亲代DNA的每一条链为模板，按碱基互补原则，分别合成新链，每个子代DNA中都含有一条亲代DNA链。 三种可能的DNA复制机制 二、 复制的起始，方向与速度 DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始位点(origin) 。 复制起始位点序列特征：富含AT，具有复制起始蛋白识别的区域。 独立完成复制的功能单位称为复制子(replicon) 。 DNA复制的起始，必须以一段具有3’端自由羟基（3’-OH）的RNA作为引物(primer) ，RNA引物的序列与模板DNA的碱基顺序相配对。 DNA复制大多为双向等速复制。 三、 半不连续复制 DNA聚合酶只能以5’→3’方向聚合子代DNA链，即模板DNA链的前进方向必须是3’→5’。 复制时，1条链的前进方向与复制叉打开方向是一致的，可连续合成，称为先导链(leading strand)，另一条链的前进方向与复制叉打开方向相反，不能连续复制，称为滞后链(lagging strand)。所以DNA的复制是半不连续复制。 滞后链的复制过程: 先以片段的形式合成冈崎片段，多个冈崎片段再连接成完整的链。 四、DNA聚合酶催化，多种蛋白质参与 （一）、DNA聚合酶（DNA polymerase，DNA pol） 活性：1. 5((3( 的聚合酶活性 聚合反应： 底物－－dNTP 2. 核酸外切酶活性 DNA聚合酶的核酸外切酶活性 3( ( 5(外切酶活性 能辨认错配的碱基对，并将其水解。 5( ( 3(外切酶活性 切除突变的 DNA片段与冈崎片段中的引物。 DNA聚合酶的种类 在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ）。参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。 原核生物中的三种DNA聚合酶? ? pol Ⅰ pol Ⅱ pol Ⅲ 5→3聚合酶活性 + + + 5→3外切酶活性 + - - 3→5外切酶活性 + + + 生理功能 填补缺口 修复损伤 校正错误 主要起修复作用 复制先导链与冈崎片段 校正错误 pol Ⅰ可被特异的蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段保留了两种酶活性,即5‘→3’聚合酶和3‘→5’外切酶活性，通常被称为Klenow 片段。 真核生物的DNA聚合酶 DNA-pol ( ( ( ( ( 分子量(kD) 16.5 4.0 14.0 12.5 25.5 5→3聚合酶活性 ++ ? +++ +++ +++ 3→5外切酶活性 - - + + + 生理功能 起始引发 引物酶活性 低保真度复制 线粒体DNA复制 延长子代链的主要酶,解螺旋酶活性 填补缺口,切除修复,重组 （二）、单链DNA结合蛋白（SSB蛋白） 单链DNA结合蛋白是一些能够与单链DNA结合的蛋白质，以四聚体形式与单链DNA结合，起保持单链的存在的作用。 （三）、解链酶（helicase） 解链酶，又称解旋酶，解螺旋酶 ，是用于解开DNA双链的酶蛋白。 延模板链移动，每解开一对碱基，需消耗2分子ATP。 （四）、DNA拓扑异构酶 ( topoisomerase) 能够松解DNA超螺旋结构的酶。 拓扑异构酶的作用特点 能水解连接磷酸二酯键 （五）、DNA连接酶 DNA连接酶(DNA ligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。滞后链冈崎片段的连接。 第三节 DNA的复制的过程 一、 复制的起始 二、 复制的延长 三、 复制的终止 四、 环状DNA的复制 五、 端粒与端粒酶 一、复制的起始 DNA复制的起始由两步构成。 1．解旋解链，形成复制叉： A. DnaA蛋白识别复制起始序列，由拓扑异构酶和解链酶作用，使DNA双螺旋结构解开，形成两条单链DNA。 B. 单链DNA结合蛋白（SSB）四聚体结合在两条单链DNA上，形成复制叉。 2．引发体组装和引物合成： A. 由解链酶(DnaB蛋白) 等6个蛋白装配成引发前体，并与引发酶(DnaG蛋白) 形成引发体； B. 在引发酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段作为引物，从而获得3端自由羟基（3-OH）。 引发体的组装形成 含有解螺旋酶(DnaB蛋白)、DnaC蛋白、引物酶和DNA复制起始区域的复合结构称为引发体。 二、复制的延长 复制的延长指在DNA聚合酶催化下，