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甜菜碱抗菌材料的制备及表征 左华江 鹿桂乾 符若文﹡ （中山大学化学与化学工程学院 材料科学研究所 广东 广州 510275） 摘要：本实验合成了硫酸甜菜碱（BS）及其均聚物（PBS）,对BS的合成条件进行了探索.并以大肠杆菌(E.coli)为模拟体系,采用平板活菌记数法考察了自制的硫酸甜菜碱（BS）及其聚合物(PBS)的抗菌性能,并考察了浓度、时间、pH、盐度四个因素对BS和PBS的抗菌性能的影响规律. 关键词：硫酸甜菜碱,合成,抗菌性能 引言 世界上相继发生的O-157: H7传染、SARS病毒感染以及禽流感H5N1病毒流行对人类生存造成严重威胁[1].抗菌材料用于制造各种器件和用品,能杀灭或抑制(2.3硫酸甜菜碱单体（BS）的合成 在250ml的两颈圆底烧瓶内,加入21.4mlDMAEMA和51.2ml异丙醇,控制温度为15℃,接电磁搅拌和冷凝水,然后,用滴液漏斗逐滴滴加13.2ml硫酸二甲酯和22.4ml异丙醇的混合液到反应瓶内,30～40min内加入完毕,并在该温度下继续反应约4～5h. 反应完毕后,将反应产物混合液保存到4℃冰箱内.放置约三四天后,有大量白色晶体析出.抽滤.用无水乙醚洗几次,然后真空干燥. 2.4 BS均聚物PBS的合成 称取一定量的单体和过硫酸胺引发剂到圆底烧瓶内（引发剂的质量为单体的0.04％）,采用水作为溶剂,单体质量：水的质量＝30：100.控制温度55℃,反应约8h. 反应结束后,将反应混合液倒入无水乙醇中,并用玻棒搅拌,聚合物粘附在玻棒上,成团状析出.用无水乙醇反复洗涤几次.抽滤,真空干燥. 2.5 BS的定性鉴定[3] 由于BS是两性离子型单体,需采用酸性溴酚蓝法和碱性亚甲基蓝试验共同鉴定. 酸性溴酚蓝法（检验阳离子型的存在）操作如下：加入氯仿5ml、0.1％溴酚蓝－稀乙醇溶液5ml及6N盐酸1ml入试管内,再滴加BS的溶液于试管中,激烈振荡混合.该法是阳离子型表面活性剂的定性检验法. 碱性亚甲基蓝试验（检验阴离子型的存在）操作如下：：加入氯仿5ml、0.1％亚甲基蓝溶液5ml及6N氢氧化钠水溶液1ml入试管内,再滴加BS的溶液于试管中,激烈振荡混合.该法是阴离子型官能团的定性检验法. 2.6 BS的红外光谱、核磁光谱 红外光谱（FT－IR）的测试条件：将样品溶液涂于KBr压片上，用Nicolet 250型红外分光光度计在4000～400cm-1范围内摄谱。 核磁光谱（H-NMR）的测试条件：将样品真空干燥后，用重水溶解在洗净的核磁管内，然后用德国Isruker Digital NMR AVANCE 400型核磁共振仪测试。 抗菌性能的表征 2.7.1 平板活菌计数法 这是最直接的方法，可以较为准确的测定溶液中的活菌数目，理论上认为高度稀释时每个活的单细胞菌能繁殖成一个菌落，因而可以将菌悬液按照一系列的梯度稀释，培养后取最适合的进行计数，通过长出的菌落数推算菌悬浮液中的活菌数。 2.7.2 BS和PBS的MBC值的测定 在试管中加入2ml营养液作为稀释液,加入2ml含有50mg/ml抗菌剂的营养液,然后逐级稀释,得到一组含有不同抗菌剂浓度的药物试管,然后向每个不同抗菌剂浓度的试管中加入2ml107CFU/ml的菌液,在36℃～37℃条件下振荡培养24h,每个样品选取4～5个处于澄清到混浊过渡的试管,移取0.1mL混合培养液放入平皿中培养24h,看是否有菌生长,以无菌繁殖的最高稀释管的抗菌剂浓度为该抗菌剂的最低杀菌浓度（MBC）. 3　结果与讨论 3.1 单体定性鉴定结果 酸性溴酚蓝法鉴定结果氯仿层为黄色,碱性亚甲基兰法鉴定结果氯仿层为蓝紫色.这说明所合成的BS确实具两性离子的性质.在酸性、碱性环境中,两性化合物BS分别具有阳离子、阴离子的性质,从而与氯仿络合显色. BS的红外鉴定(FT-IR) BS的红外分析数据： 3490cm-1 H2O峰,2900 cm-1饱和C-H的伸缩振动,1720 cm-1和1250 cm-1是酯基的吸收,1630 cm-1是C=C的伸缩振动,1000 cm-1是＝CH的摇摆振动,1200 cm-1是－C－N的伸缩振动. BS的核磁鉴定(H-NMR) 图ⅡBS的H-NMR图 （BS的结构式） H-NMR分析，结构式中的不同官能团的吸收峰如下所示: 6.47ppm a;6.17ppm b;1.71ppm c;.80ppm d; 3.86ppm e; 3.69ppm f; 3.12ppm g; 1.77ppm h; 4.84ppm（H2O）峰. BS的合成条件探索 图Ⅲ 时间的影响 图Ⅳ 配比的影响 表Ⅰ 温度的影响 温度/℃