药物的定量分析与方法验证.pptVIP

基本要求 二、不经有机破坏的分析方法 （一）直接测定法 例如：富马酸亚铁的含量测定 第二节 定量分析方法特点 二、光谱分析法 光谱 光谱分析法 分光光度法 分类 紫外-可见分光光度法 红外分光光度法 原子吸收分光光度法 荧光分光光度法 火焰光度法 一、常用样品的种类、采集和贮藏 （一）血液 测定药物浓度指测定血浆或血清中的药物浓度 采集→制备血浆或血清 贮藏：短期4℃、长期-20 ℃ （二）唾液 采集：自然分泌 贮藏： 4℃以下 （三）尿液 用于药物剂量回收研究，尿清除率、生物利用度等的研究 采集：自然排尿，时间尿，一定时间内排泄的尿液全部储存起来，记录体积 二、生物样品分析前处理技术 为什么要对生物样品进行前处理？ 蛋白质的去除方法？ 常用的分离、纯化方法？ 被测组分的浓集方法？ （一）去除蛋白质 释放结合型药物、减少提取过程中乳化、保护仪器、提高灵敏度 加入与水混溶的有机溶剂 中性盐 强酸 加入含锌盐、铜盐的沉淀剂 酶解法 （二）缀合物的水解 酸水解/酶水解 （三）有机破坏 测定生物样品中的金属离子，常用HNO3-HClO4作为消解剂，一般得到高价态金属离子 （四）分离、纯化和浓集 使被测物在所用分析技术的检测范围内，常用萃取法 液-液萃取法（LLE） 三、定量分析方法验证 （五）化学衍生化 可使药物：具有能被分离的性质 提高灵敏度 增强稳定性 提高对光学异构体分离的能力 练习与思考 自动进样器 返 回 色谱柱 返 回 填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶 检测器 返 回 测定方法 1)内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 对照液（R）： AR CR 峰面积 含量 内标液（S）： AS CS 供试液（X）： AX CX f= ———— AS/CS AR /CR f= ———— A’S / C’S Ax /Cx Cx=f· ———— Ax A’S / C’S 2)外标法测定供试品中主成分含量 对照液（R）： AR CR 供试液（X）： AX CX CX CR AX AR ——＝—— CX＝———— CR· AX AR 要求：进样量准确、操作条件稳定 （二）GC法 1. 对GC仪器一般要求 载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径2～4mm，长1～10m，内装吸附剂 高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径0.2～0.5mm，长10～100m，一般 为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联 固定液 检测器：氢火焰离子化检测器 色谱图：30分钟内记录完毕 2. 色谱适用性实验：同HPLC 3.测定法：同HPLC 第三节 药品分析方法验证 目的：证明采用的方法适合于相应检测要求。 起草药品质量标准 生产工艺变更 制剂组分改变 原分析方法修订 均需对分析方法进行验证 验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性 一、准确度 是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示 （一）含量测定方法的准确度 1. 原料药：可用已知纯度对照品或供试品进行测定；或与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较 2. 制剂：考察其他组分和辅料对回收率的影响 ①用含已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅料）进行测定，回收率计算同原料药 ②向制剂中加入已知量的被测物进行测定 ③与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较 （二）具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价回收率；用UV和HPLC法时，一般回收率可达98%～102%；容量法可达99.7%～100.3% 二、精密度 是指在规定的测试条件下，同一个均匀样 品，经多次测定所得结果之间的接近程度。 （一）精密度表示方法 1. 偏差(deviation ,