实验五可溶性总糖的测定.pptVIP

可溶性总糖的测定(蒽酮比色法) 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 　 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 四、操作步骤 １、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml，加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。 ２、植物样品中可溶性糖的提取 将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克，放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ml置另一50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测定。 ３、测定 吸取１ml已稀释的提取液于大试管中，加入4.0ml蒽酮试剂，以一操作同标准曲线制作。比色波长620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。 查表所得糖含量×稀释倍数 五、结果处理　　　 植物样品含糖量（％）＝查表所得糖含量（μg）×稀释倍数／样品重（g）×106×100 * * １、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗；容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配制使用。 ３、材料 小麦 80 60 40 30 20 10 0 葡萄糖含量（μg） 0.2 0.4 0.6 0.7 0.8 0.9 1 蒸馏水（ml） 0.8 0.6 0.4 0.3 0.2 0.1 0 葡萄糖标准液（ml） 7 6 5 4 3 2 1 管号 *