生物工业菌种与种子的扩大培养.docVIP

第四章 生物工业菌种与种子的扩大培养 第一节 工业微生物菌种的衰退、复壮与保藏一、微生物菌种的衰退⒈ 菌种衰退的原因菌种衰退的原因有两个方面：一是菌种保藏不妥；二是菌种生长的条件要求没有得到满足，或是遇到不利的条件，或是失去某些需要的条件。此外还有经诱变得来的新菌株发生回复突变，从而丧失新的特征等情况。菌种连续传代是菌种发生衰退的直接原因。由于连续传代使菌种经常处于旺盛的生长状态，且每次传代时营养和环境等培养条件都是在不断地变化，与处于休眠状态的菌种相比，细胞的自发突变率要高得多。因此，菌株经过连续传代后，含突变基因的个体在数量上逐渐占优势，退化现象就逐渐显露出来。⒉ 菌种性能的改变⑴ 菌种遗传特性的改变 从菌种遗传机理这一微观角度来看，菌种遗传特性的改变主要有如下三个原因。① 异核现象导致微生物群体发生变异。② 自发突变导致菌种遗传特性改变。③ 突变所产生的变种或杂交重组所形成的杂种往往不稳定，容易发生回复突变或产生分离子，以致在菌种这一群体中形成具有不同基因型（亦称遗传型）的个体。⑵ 菌种生理状况的改变⒊ 防止菌种衰退的措施⑴ 菌种的分离⑵ 菌种的复壮狭义的复壮指的是菌种已经发生衰退后，再通过纯种分离和性能测定等方法，从衰退的群体中找出尚未衰退的少数个体，以达到恢复该菌种原有典型性状的一种措施。而广义的复壮应该是一种积极的措施，即在菌种的生产性能尚未衰退前就经常有意识地进行纯种分离和生产性能的测定工作，使菌种的生产性能逐步提高，所以，这实际上是一种利用自发突变(正突变)从生产中不断进行选种的工作。⑶ 提供良好的环境条件⑷ 用优良的保藏方法⑸ 定期纯化菌种二、菌种的复壮⑴ 纯种分离 ⑵ 通过寄主体进行复壮 ⑶ 淘汰已衰退的个体三、菌种的保藏⒈ 菌种保藏的原理⒉ 菌种保藏方法⑴ 斜面低温保藏法 ⑵ 液体石蜡封存保藏法 ⑶ 固体曲保藏法 ⑷ 砂土管保藏法 ⑸ 冷冻干燥法 ⑹ 液氮超低温保藏法⒊ 菌种保藏的注意事项⑴ 菌种在保藏前所处的状态 ⑵ 菌种保藏所用的基质 ⑶ 操作过程对细胞结构的损害 第二节 工业微生物菌种的选育一、自然选育自然选育包括从自然界分离获得菌株和根据菌种的自发突变进行筛选而获得菌种。⒈ 从自然界分离获得菌株从自然界分离新菌种一般包括以下几个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定等。⒉ 从自发突变体中获得菌株二、诱变育种的程序诱变育种的主要环节是：① 以合适的诱变剂处理大量而均匀分散的微生物细胞悬浮液(细胞或孢子)，以引起绝大多数细胞致死的同时，使存活个体中DNA碱基变异频率大幅度提高；② 用合适的方法淘汰负变异株，选出极少数性能优良的正变异株，以达到培育优良菌株的目的。⒈ 出发菌株的选择⒉ 菌悬液的制备⒊ 前培养⒋ 诱变能诱发基因突变并使突变率提高到超过自然突变水平的物理化学因子都称为诱变剂。可分为物理诱变剂和化学诱变剂两大类。⒌ 变异菌株的分离和筛选三、诱变育种方案设计㈠ 突变的诱发诱变剂所造成的DNA分子的某一位置的结构改变称为前突变。前突变可以通过影响DNA复制而成为真正的突变，也可以经过修复重新回到原有的结构，即不发生突变。⒈ 诱变剂接触DNA分子⒉ DNA损伤的修复DNA损伤的修复和基因突变有着密切的关系。已发现微生物有五种修复DNA损伤方式，它们是：光复活作用、切补修复、重组修复、SOS修复系统、DNA多聚酶的校正作用。⒊ 从前突变到突变⒋ 从突变到突变表型突变基因的出现并不等于突变表型的出现，表型的改变落后于基因型改变的现象称为表型迟延。表型迟延有两种原因：分离性迟延和生理性迟延。⑴ 分离性迟延 分离性迟延实际上是经诱变处理后，细胞中的基因处于不纯的状态(野生型的基因和突变型的基因并存于同一细胞中)，突变型基因由于属于隐性基因而暂时得不到表达，需经过复制、分离，在细胞中处于纯的状态(一细胞中只有突变型基因，没有野生型基因)时，其性状才得以表达。⑵ 生理性迟延 突变基因由杂合状态变为纯合状态时，还不一定出现突变表型，新的表型必须等到原有基因的产物稀释到某一程度后才能表现出来。㈡ 诱变剂的种类及选择⒈ 诱变剂⒉ 影响诱变效果的因素㈢ 出发菌株的选择① 选择纯种作为出发菌株，借以排除异核体或异质体（表型相同，基因型不同）的影响。② 选择出发菌株，不仅是选产量高的，还应该考虑其他因素。③ 选择对诱变剂敏感的菌株作为出发菌株，不但可以提高变异频率，而且高产突变株的出现率也大。㈣ 筛选的方法⒈ 制定筛选方案⒉ 营养缺陷型的筛选方法营养缺陷型（auxotroph）是指原菌株由于发生基因突变，致使合成途径中某一步骤发生缺陷，从而丧失了合成某些物质的能力，必须在培养中外源补加该营养物质才能生