液相色谱串联质谱法定鸡肉中20种抗球虫药物多残留的研究.docVIP

液相色谱串联质谱法测定鸡肉中20种抗球虫药物多残留的研究 岳振峰*1 康海宁1 陈小霞2 肖陈贵1 侯乐锡1 罗志军1 赵凤娟1 沈金灿1 1（深圳出入境检验检疫局 深圳 518067） 2 （深圳大学教务处 深圳 518060建立了盐霉素、甲基盐霉素、莫能菌素、拉沙里菌素、马杜拉霉素、氯羟吡啶、氨丙啉、乙氧酰胺苯甲酯、4，4－二硝基均二苯脲、常山酮、克拉珠利、甲苄喹啉、癸氧喹酯、二硝托胺、地克珠利、硝米特、甲苯三嗪酮、甲苯三嗪酮砜、甲苯三嗪酮亚砜、阿克洛胺20种抗球虫药物的定量测定方法。用乙腈萃取中的抗球虫类药物残留，乙腈饱和正己烷脱脂，硅胶柱净化，浓缩，以Acquity BEH C18色谱柱为分离柱，液相色谱串联质谱仪测定，正/负离子分段扫描。在三个添加水平进行试验，回收率为~105%，相对标准偏差为1%~10.6%；该方法简便、快速、准确，各项技术指标满足国内外法规的要求，可用于样品中类药物残留的。 关键词：；多残留；液相色谱串联质谱；测定；球虫病是由寄生于宿主肠道或胆管上皮细胞内的艾美尔科原虫引起的一种寄生虫病，多在高密度舍饲的动物中流行，家禽和家兔对球虫病最易感，生产上，球虫对雏鸡、幼兔的危害最为严重，可引起营养不良、贫血、血痢、消瘦，爆发时可造成大批死亡。由于对球虫病的诊断较困难，往往在做出临床诊断之前已经造成严重的经济损失。因此，对球虫病的预防非常重要。抗球虫药物的使用对养殖业，特别是养禽业的经济效益十分巨大，其作用目前仍是无可替代的。但是，多数抗球虫药物具有较强的细胞毒性，而且抗球虫药物的使用易导致抗药性，畜牧生产中使用抗球虫药物有加大剂量的倾向。为保障动物源食品的食用安全，国内外对多数抗球虫药物制定了残留限量，并对动物性食品中抗球虫药物残留加强监控。目前检测单一抗球虫药物的方法较多，总体检测效率低下，缺乏多残留检测方法而且采用的方法多为液相色谱法，缺乏高灵敏度的确证方法。由于LC-MS/MS技术具有灵敏度高、选择性强的优点，可进行确证分析，可适用于复杂基质中多种抗球虫药物的分析，本采用乙腈进行提取，经硅胶柱净化，利用液相色谱-质谱/质谱法的选择性和抗干扰能力较强的特点，对不同类型的抗球虫药物方法、稳定，回收率和精密度均符合残留分析要求完全可以满足国内外有关法规的要求，填补了国内技术空白，可为动物组织中类药物残留的监督检验和国内的残留监控提供技术支持。Waters Quattro Premier 型液质联用仪，配电喷雾离子源，美国沃特世公司；电子天平：感量0.1mg、0.01g，瑞士梅特勒公司；漩涡混合器，REAX-Control，德国海道尔夫公司；超声波水浴，CQ-50，中国上海洁净超声波设备厂；旋转蒸发仪，Laborota4003，德国海道尔夫公司；高速离心机，3K15，德国西格玛公司；组织切碎机，TF-123，日本日立公司；均质器，T25BASIC，德国IKA公司；固相萃取装置，5982-9120，美国安捷伦公司；机械真空泵，wp6122050，美国密理博公司；吹氮浓缩仪，TurboVap-LV，美国Caliper公司；移液枪，10-100μL、20-200μL、100-1000μL、1000-5000μL，法国吉尔森公司；聚丙烯离心管：2mL、15mL、50mL，德国Greiner公司。 甲醇、乙腈、甲酸：HPLC级，德国默克公司；乙酸胺、N,N-二甲基甲酰胺：色谱纯，德国西格玛公司；正己烷：分析纯，天津科密欧化学试剂公司；无水硫酸钠：分析纯，天津福晨化学试剂厂；硅胶SPE小柱，500mg/6mL，美国西格玛公司。 抗球虫药物标准品均购自德国Dr. Ehrenstorfer公司，纯度均大于98％。标准溶液：用甲醇配制为100mg/L标准储备液，对于一些难溶于甲醇的抗球虫药物标准品，先用少量N，N-二甲基甲酰胺溶解，再用甲醇稀释至刻度，-18℃避光保存。 2.2 样品处理 称取5 g（精确至0.01 g），50 mL聚丙烯离心管中，根据样品含水量情况加入5~10 g无水硫酸钠，使混合体系摇匀后呈松散状态，放置30 min，使无水硫酸钠充分吸收样品中的水分，加入15 mL乙腈，均质3 min，低温超声提取20 min，3 000 r/min离心5 min（温度低于15 ℃），取上清液。残渣再加入15 mL 乙腈，重复提取一次，9500r/min离心5 min后合并上清液，加入10 mL乙腈饱和正己烷液液萃取两次，弃去正己烷层。将乙腈提取液转入硅胶柱中（硅胶柱使用前先加入约0.5 cm高度的无水硫酸钠，用5 mL乙腈活化），收集流出液，溶液全部通过柱体后，再加入2mL乙腈淋洗，合并流出液。将收集的流出液转移到100 mL鸡心瓶中，于40 ℃水浴上减压旋转蒸发至近干，加入1 mL乙腈，超声30 s，再加入1 m