（分离方法）白腐菌F8的分离及降解木质素能力研究.pdfVIP

( ) 第 34 卷 　第 2 期 河南师范大学学报 自然科学版 Vol . 34 　N o. 2 　2006 年 5 月 J ou rnal of H enan N orm al Uni vers i ty ( N at u ral S cience) M ay . 2006 　 　　文章编号 :1000 - 2367 (2006) 02 - 0 110 - 03 白腐菌 F8 的分离及降解木质素能力研究 王海磊 ,李 　平 ,张文钰 ,刘国生 (河南师范大学 生命科学学院 ,河南 新乡 453007) 摘 　要 :从松林土壤中分离得到一株白腐菌 F8 ,经 Bavendamn 氏显色反应证实其能产生漆酶. 在液体培养条 件下 ,该菌株能产生木质素过氧化物酶 、锰过氧化物酶和漆酶. 其降解木质素的最佳条件为 100 r/ min 、33 ℃、p H 5 . 5 、接种量 5 % ,在此条件下 ,木质素降解率达 7 1. 98 %. 关键词 : 白腐菌 ;木质素过氧化物酶 ; 锰过氧化物酶 ;漆酶 中图分类号 :Q936 　　　　　　　　　　　　　　　　文献标识码 :A 木质素是自然界中第二大生物聚合物 ,其结构复杂 ,非常难以降解[ 1 ] . 但在制浆和造纸过程中 ,降解木质 素是重要一步 ,且这一过程产生了大量环境污染物. 过去 20 年中 ,大量研究集中在白腐菌在环境污染控制中 的应用上. 白腐菌是一类丝状真菌 ,可分泌多种胞外酶 ,是 目前已知的唯一可在纯培养过程中能将木质素降 解为 CO 和 H O 的微生物 ,在自然界碳循环中起重要作用. 本文从松树林土壤中分离得到一株白腐菌 F8 , 2 2 发现其具有一定的降解木质素的能力 ,并对其降解木质素的条件进行了优化. 以期为其在环境污染控制中的 进一步应用提供理论依据. 1 　材料和方法 1 . 1 　材 　料 1. 1. 1 　分离所用土壤 河南省太行山松林土壤. 1. 1. 2 　培养基 ( 1) PDA 培养基[2 ] ; (2) 液体生长培养基[3 ] ; ( 3) 真菌选择培养基 :N aN O 2 . 0 g 、K H PO 0 . 5 g 、KCl 3 2 4 0 . 5 g 、M g SO4 0 . 5 g 、Fe SO4 0 . 0 1 g 、琼脂 15 g 、木质素磺酸钙 15 g 、青霉素 0 . 002 g 、p H 6 . 5 ,加水至 1 L ; (4) 液体驯化培养基 :木质素磺酸钙 1 g/ L ,其余成分同液体生长培养基 ; (5) 木质素磺酸钙溶液 :木质素磺酸 钙2 0 16 . 18 mg/ L ,其余成分同液体生长培养基. 1 . 2 　方 　法 1. 2 . 1 　真菌的分离 将土样捣碎 ,取 10 g 与 100 ml 无菌水在三角瓶中震荡 10 min ,用无菌吸管吸取土悬液 0 . 5 ml 放入装有 4 . 5 ml 无菌水的试管中 ,振荡混匀 ,依此法将土悬液梯度稀释至 10 - 4 . 从 10 - 2 、10 - 3 、10 - 4 3 个试管中各取 1 ml分别涂布在真菌选择培养基培养皿上 ,30 ℃下培养 2 ～4 d ,挑取单菌落纯化后 ,移至 PDA 培养基斜面 上进行培养 ,每个菌株接 6 支试管 ,3 管备用 ,3 管冰箱保藏. 1. 2 . 2 　Bavendamn 氏显色反应 在纯培养中 ,用打孔器制菌塞 ,接种于加入 0 . 4 mmol/ L 焦性没食子酸的 PDA 平板上 ,p