重组抗c-Met%2fPE38KDEL免疫毒素的构建、表达及对肝癌细胞抑制作用的研究.pdfVIP

重组抗c．Met／PE38KDEL免疫毒素的构建、表达及对肝癌细胞抑制作用的研究 刘政I，朱晓娟1，朱进3，冯振卿2，范忐宁l，季国忠I (1南京医科大学第二附属医院消化医学中心，江苏南京210011；2南京医科大学卫生 部抗体 [摘要] 目的：构建绿脓杆菌外毒素PE38KDEL融合全人源抗c—Met单链抗体原 核表达载体，并对其产物进行变性、复性和纯化，检测其对肝癌细胞系的毒性作 用。方法：以从人源天然Fab抗体库中筛选出的AM2-26克隆作为模板扩增出人 基因克隆入pBAD／GIIIA表达载体中，重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两 片段连接工F确；转化大肠杆菌ToplOF’，左旋阿拉伯糖诱导表达，采用镍离子 螯合层析法纯化变性的包涵体样品，并用连续梯度透析的方法对纯化后的包涵体 进行复性；采用流式细胞术鉴定复性产物与靶细胞的结合活性，MTT法检测c— Met／PE38KDEL免疫毒素对肝癌细胞的体外杀伤活性。结果：成功构建了免疫毒 性后的免疫毒素c—Met／PE38KDEL具有与靶细胞特异性结合的活性并且对 SMMC7721细胞系具有较明显的杀伤作用。结论：全人源抗c—Met单链抗体与 PE38KDEL重组免疫毒素的成功表达纯化及对人肝癌细胞系的试验结果，为进一 步肝癌的导向治疗提供依据。 [关键词]c—Met；PE38；免疫毒素；肝细胞癌；表达；纯化 and of characterizat{onan{mmunotoxin Construct{on，expression ahumananti—c—Met fusedtoPE38KDEL containing single—chainantibody ZHU Xiao—juanl，ZHUJin3，FENGZhen—qin92，LIUZhengx of Affil Second iated talof (1DepartmentGastroenterology，the Hospi 21001 of of NJMU，Nanjing1：2KeyLaboratoryAntibody Technique of Mi Area MinistryHealth，NJMU，Nanjing210029：aPLA Nanjinglitary i 21 Command，Nanj0002，China) ng [Abstract] constructand arecombinant Objective：To express immunotoxin vector ofahumananti——C——Met expressioncomposed single—· chainFv andaPE38KDEL toexami13ethe fragmentgene gene，and ofthe onhumanHCCcelllineS删C7721． cytotoxicitypurlfiedproduct