几种分子标记方法相结合建立的新型分子标记方法.pdfVIP

维普资讯 — — 生 兰 堡 — — QQ!生篁42堂笙!塑 几种分子标记方法相结合建立的新型分子标记方法木 徐安毕 王文泉～ (中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室 海南海 口 5711O1) 摘要 介绍 了几种分子标记相结合 ，产生 的分子标记新方法的基本原理 、优缺点， 如 AFLP、 SCAR、CAPS以及 RMAPD分子标记 。其 中主要介绍 了RMAPD，对 RMAPD作为一种新型分子标记 进 行探讨。 关键词 RMAPD SCAR AFLP CAPS 分子标记 DNA分子标记是指 由于 DNA分子发生缺失 、插 目前一种十分理想有效的分子标记 。然而AFLP技术流 入、易位、倒位、重排或由于存在长短与排列不一的重 程长，难度较大，对操作人员的技术水平要求高。在一般 复序列等机制而产生的多态性标记。分子标记的方法 实验室开展此项技术尚存在一定困难。 很多，笔者介绍 由几种分子标记相结合 ，产生的3类 2 随机微卫星扩增多态 DNA(I：1MAPD) 分子标记方法的基本原理、优缺点 ，如 RAPD、AFLP、 2．1 RMAPD 的原理 随机微 卫 星扩增 多态 DNA CAPS以及 RMAPD分子标记 。其 中RMAPD是 由蓝贤 (RMAPD)是 2oo5年蓝贤勇等在 RAPD和微卫星 (SSR) 勇等 (2005)发展的新型检测 DNA多态性的方法 ．在 的基础上发展起来 的一种检测 DNA 多态性 的新方 DNA分子标记方法的发展中有着很大的意义。 法 。它利用随机引物和微卫星的上游或下游引物一起 1 AFLP标记技术 作为该扩增的引物，在TaqDNA聚合酶 、MgC1：和模板 1．1 AFLP原理与特点 扩增片段长度多态性 DNA DNA等共同作用下进行 PCR扩增的一种分子标记方 (amplifiedfragmentlengtholymerphism，AFLP)是 1992年 法。其核心是 RMAPD引物的有效性问题。蓝贤勇等通 荷兰科学家Zabeau和Vos将 RFLP的可靠性和 RAPD 过对西农萨能奶山羊群体 RMAPD电泳检测 、数据统 的简便性结合起来。创立的一种检测 DNA多态性的新 计分析及验证实验等证 明RMAPD的引物是有效的。 方法。其基本原理是：将基因组 DNA用 2种或 2种 以 通过与微卫星和 RAPD标记比较 。发现RMAPD标记 上内切酶进行切割，然后选择特定的片段进行PCR扩 在扩增引物、扩增程序和重复性等方面区别于微卫星 增，使用双链人工 “接头”与基因组DNA的酶切片段相 和RMAPD标记；它是 RAPD标记的一种广义的延伸， 连接作为扩增反应模板，“接头”与 “接头”相邻的酶切 但又不完全等同于RAPD标记。因此确定RMAPD是 片段的几个碱基序列作为引物的结合位点。这样就只 一 种新的分子标记方法 。该方法也具有 DNA标记的 有那些两端序列能与选择碱基配对的限制性片段被 特点。在群体遗传结构和亲缘关系分析以及标记辅助 扩增，再在高分辨率的测序胶上分离这些扩增产物。 选择等动物遗传育种领域具有广阔的应用前景。 1，2 AFLP的应用前景 AFLP技术兼具 RFLP的可靠 2．2 RMAPD作为一种新型分子标记 的探讨 由于 性和RAPD的灵敏性 ，且方法简便、成本较低、结果快 RMAPD标记方法中含有随机引物 ，故认为能影响 速可靠、无需制备探针和分子杂交 、信息量大及应用广 RAPD的因素也可能影响R