一种家蝇幼虫热稳定抗菌肽的分离纯化.pdfVIP

( ) 第 35 卷　第 4 期 南 开 大 学 学 报 自然科学 V o l. 35　№4 　2002 年 12 月 A cta S cientiarum N atu ralium U niversitatisN ankaiensis D ec. 2002　 文章编号: (2002) 一种家蝇幼虫热稳定抗菌肽的分离纯化 1 1 1 1 1 1 2 2 3 盛长忠 　安春菊 　耿　华 　张一鸣 　李德森 　杜荣骞 　纪明耀 　李洪俊 　周嘉伟 ( 1. 南开大学生命科学学院, 天津, 300071; 2. 大港油田集团有限责任公司, 300280; 3. 北京诚志生命科技有限公司, 北京, 100083) 摘 要 　　本文对家蝇三龄幼虫进行了超声处理, 以诱导其产生抗菌物质. . 通过高温处理、酸性处理后, 抗菌物质粗提 中大量的热不稳定蛋白和酸性蛋白发生沉淀而被去除. 将经过上述处理的粗提液经过一步 Sephadex G75 凝胶 过滤层析、两步CM Sepharo se 阳离子交换层析后, 得到一个单一的具有抗阳性球菌的峰. SD S聚丙烯酰胺凝胶 电泳结果显示为一条带, 相对分子质量大约为 7000, 将其命名为H 1. H 1 为一种热稳定的碱性抗菌多肽. 关键词: 家蝇; 抗菌肽; 凝胶过滤层析; 离子交换层析; SD S聚丙烯酰胺凝胶电泳 中图分类号: TQ 93　　　　　　　　　　文献标识码: A 0　引　　言 昆虫抗菌肽具有分子量小、热稳定、水溶性好、抗菌谱广及材料来源丰富等优点, 它的应用前景十分广 阔. 分离提纯抗菌肽类物质应用于医药、兽药以及无公害农药, 作为目前抗生素的理想替代品, 在改善人类 的生存质量、保护环境免受农药污染、发展生态农业都有重要的意义. 在所有的昆虫资源中, 家蝇占有极其 重要的地位. 它表现出极强的适应恶劣环境的能力, 对其免疫防御体系的研究具有理论意义和应用价值, 有一些专家对此已进行了研究[ 1～ 4 ]. 作者曾经对家蝇蛹进行了抗菌活性的诱导, 并通过统计学的逐步回归分析, 筛选出对家蝇蛹抗菌活性 有显著贡献的耐热低分子量蛋白多肽, 确定了它们的表达规律. 本文在此基础上用超声波处理了家蝇幼 虫使其表达抗菌物质, 并根据其特有的理化性质进行了分离纯化. 1　材料与方法 1. 1　实验材料和供试菌株 家蝇( ) 幼虫由本实验室饲养. M usca d om estica v icina 溶壁微球菌( ) , 金黄色葡萄球菌( ) , 本实验室保存. M icrococcus ly sod eik ticus S tap hy lococcus au reus 1. 2　抗菌物质的诱导与粗提液制备 ( ) 采用超声波诱导法. 3 幼虫用超声破碎仪 35 、120 处理 1 , 然后置于人工饲料中饲养 24 , d kH z W