亚硒酸钠对胃上皮癌细胞增殖和凋亡的影响.pdfVIP

刘木清等! 亚硒酸钠对胃上皮癌细胞增殖和凋亡的影响! 第$ 期 ·@= · 亚硒酸钠对胃上皮癌细胞增殖和凋亡的影响! ! ! ! 刘木清! 邵世和 段秀杰 ! 孙丽媛! （北华大学医学院微生物教研室，吉林 #$% # ） ! ! 中国图书分类号! #$! ! 文献标识码! %! ! 文章编号! ’’’()*)+（,’’- ）’,(’).(’# ! ! 胃癌的发生、发展不仅与肿瘤细胞分化异常、增 ;78? * BC+ 缓冲液洗涤# 次，每次= 分钟，加入$I =E 殖过度有关，而且与细胞凋亡减少有关。硒是人体 戊二醛固定、饿酸固定、石蜡包埋、染色，用透射电镜 必需的微量元素，具有广泛的生物学功能，特别是对 观察凋亡细胞。 多种肿瘤的生长具有抑制作用［］。本文通过分裂 / ,/ )! H(G 末端原位标记染色法（’()* ）检测细 ’()* 染色技术等探 胞凋亡指数! 取对数期胃上皮癌细胞= %@ 培养 指数试验、流式细胞术、电镜、 讨了亚硒酸钠对胃上皮癌细胞增殖和凋亡的影响，进 $@ 小时，加入终浓度为$% 、% 和= ;78? * 的亚硒酸 一步阐明亚硒酸钠抑制胃上皮癌细胞生长的机理。 钠，与细胞共同培养$@ 小时和@A 小时，对照组不加 亚硒酸钠。按上述时间终止培养，收集细胞，@ E 多 ! 材料与方法 聚甲醛固定#% 分钟，% I ;78? * BC+ 缓冲液洗涤# / ! 材料! 胃上皮癌细胞系（+,-./0% ）购自吉林 次，每次= 分钟，预冷% I E L1M76.N%% 处理，@ D $ 省肿瘤研究所；细胞凋亡原位检测试剂盒购自北京 分钟。BC+ 洗涤。以下步骤按试剂盒说明进行。每 中山公司；亚硒酸钠购自*123 3456787913: 公司；胎 片分别加’()* 反应液=% 8 ，阴性对照仅加标记 牛血清、二甲基亚枫、胰蛋白酶购自北京鼎国生物技 液，#/ D J% 分钟，BC+ 洗涤。加抗OP-.碱性磷酸酶 术发展中心（+19; 分装）。 应用液=% 8 ，#/ D #% 分钟，BC+ 洗涤。加碱性磷酸 / ,! 实验方法 酶底物显色液C-PB? (C $= 8 ，暗处显色= 分钟， / ,/ ! 细胞分裂指数检测! 收集对数生长期的胃 BC+ 洗涤。加核快红一滴复染# 秒，去离子水冲洗， 上皮癌细胞，用培养液稀释成= %= 个? ;8 细胞悬 加水性封片剂封片，光学显微镜观察凋亡细胞并计 液，分别加入放有盖玻片的#= ;; 培养皿中，每皿$ 算凋亡指数，经’()* 试剂盒染色，细胞核内出现 ;8 。加入亚硒酸钠溶液使其终浓度分别为$% 、% 和 蓝黑色或黑色颗粒为凋亡细胞。 GQ7QM7:1: 16R3S ，GP ）计算方法：数= = ;78? * ，培养$@ 、@A 和/$ 小时后取出皿中的盖 凋亡指数（ 片，干燥后固定,13;:3 染色，计数 %%% 个细胞得 个高倍镜T %%% 个细胞，分别计数凋亡细胞和总细 出处于分裂细胞的比例。 胞数。GP U 凋亡细胞数? 总细胞数 %% E 。 / ,/ ,! 胃上皮癌细胞的细胞周期变化检测! 取对 ,! 结果 数期胃上皮癌细胞= %@ 培养$@ 小时，分别加入 终浓度分别为$% 、% 和= ;78? * 的亚硒酸钠共同 ,/ ! 亚硒酸钠对胃上皮癌细胞分裂指数的影响! 培养$@ 小时；收集细胞，BC+ 洗涤，乙醇@ D 固定$