乙型肝炎的分子流行病学研究方法概述.pdfVIP

海峡预防医学杂志2007年第 13卷第2期 5，raitJPrevMed20o7Vol.13No.2 25 文章编号:1007一2705(2007)02一0025一03 中图分类号:RslZ6‘ 文献标识码:A 【综述】 乙型肝炎的分子流行病学研究方法概述 纪惠玲，郭燕 (综述);江家骥 (审校) 摘要:分子流行病学是从根本上对疾病的发生、发展、分布、来源进行追踪、分析，为研究提供更为准确的信息。随 着分子生物学技术的快速发展和人们对乙肝病毒的深入研究，乙肝病毒在定性、定量、基因变异的检测，基因型的鉴定以 及易感墓因等方面的研究都取得很大进展。本文将近几年乙肝分子流行病学研究中常用的分子生物学技术作一回顾。 关键词:乙肝病毒;分子流行病学;疾病控制 乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个世界性的公共卫生问 液相，此时由于无荧光淬灭染料作用而发荧光，通过荧光光谱 题，我国是乙肝病毒感染高发区，约 1.2亿人携带乙肝病毒表 分析仪检测荧光强度即可得扩增产物量，其灵敏度可达 103 面抗原(HBsAg)’「〕，HBv的检测及防治尤其重要。传统的流 copies/ml数量级。Venkatakrishna[3」在此基础上建立了目标 行病学调查主要利用免疫学方法检测HBV的血清标志物，随 捕获PCR，由于使用了内标和能够特异结合样品中HBVDNA 着分子生物学的迅速发展，分子生物学技术在乙肝流行病学调 的磁珠，提高了灵敏度和重复性，可检出低至130copies/ml的 查中得到广泛运用。乙肝的分子流行病学研究对于理解不同 HBV，适于低拷贝样品的检测。新型的TaqMan-MGB探针采 流行株间的差异、寻找和追踪传染源、分析病毒进化规律、判断 用非荧光淬灭基团，本身不产生荧光，大大降低了信号本底强 预后和选择抗病毒治疗、制备疫苗等方面都具有重要的指导意 度，同时，探针上连接的MGB修饰基团可将探针Tm值提高 义。本文就近几年乙肝分子流行病学研究中常用的分子生物 10℃左右，为了达到同样的Tm值，探针可以设计得更短，在模 学技术作一综述。 板碱基组成不理想的情况下更易设计成功。zhao[4j等对174 份临床HBV血样的检测说明MGB法结果准确可靠、敏感性 1 普通PCR定性检测 高，检测的线性范围较TaqMan更宽，在10。一10，copies/ml 临床常用的EIJSA方法对 HBV的3对血清学标记物 之间。其他利用探针的荧光PCR还有分子信标、荧光标记引 (HBsAg与抗HBs、HBeAg与抗HBe、HBcAg与抗HBc)进行 物和杂交探针等方法。 检测，但在病毒载量较低[，〕((lxlo，一Zxlo)‘及HBv前c 2.Z SYBRGreen工法 该法是一种不对称著类荧光染料， 区变异导致的HBeAg表达缺失等情况下，EIJSA就不能准确 可以非特异嵌合于DNA双螺旋结构中的小沟内发射荧光信 反映病毒滴度水平。PCR通过两段特异性寡核甘酸引物，在 号。结合状态的荧光强度较游离状态增强千倍，在PCR扩增 体外经DNA聚合酶催化，扩增与两引物互补的DNA序列之 体系中直接加人SYBRGreen l可以方便地进行DNA实时定 间的区段，达到检测样品中是否有该序列的目的。PCR较血 量检测。此法操作方便，价格低廉，灵敏度高，但SYBRGreen 清学方法更敏感，但特异性和重复性较低，若结合斑点杂交、微 工与双螺旋DNA的嵌合并无选择性，与引物二聚体的非特异 孔板杂交、滤膜核酸探针杂交等核酸杂交方法和酶联免疫等方 结合会升高本底，影响结果判定。目前引物二聚体引起的假阳 法对PCR产物进行分析，灵敏度和特异性均大为提高。 性问题可以通过带有溶解曲线的分析软件加以解决。Maimu- na等仁5〕利用sYBRGreenl法检测318位慢性HBV携带者 2 实时荧光定tPCR 和22位无症状携带者拉米夫定治疗后血清中的病毒载量，结