低温纤维素酶产生菌的筛选、鉴定、生长特性及酶学性质.pdfVIP

维普资讯 高技术通讯 2005年4月 第 l5卷 第4期 低温纤维素酶产生菌的筛选、鉴定、生长特性及酶学性质① 曾胤新② 俞 勇 陈 波 李会荣 (中国极地研究中心国家海洋局极地科学重点实验室 上海 200129) 摘 要 从北极楚科奇海分离出一株产纤维素酶的耐冷假交替单胞菌BSw20308。研究 表明：该菌最适生长温度 l0℃，35 不生长；在 pH7．0～8．0、含2．0％～3．0％NaCl的培养 基条件下最适宜菌株生长与产酶；可溶性淀粉、酵母浸出液是有利于菌株生长及产酶的碳 源、氮源物质；蔗糖、可溶性淀粉、麦芽糖及麸皮对CMC~e的合成具有明显诱导作用； CMC、麸皮、可溶性淀粉及麦芽糖对滤纸酶的合成有一定诱导作用，单糖与部分双糖(蔗 糖、纤维二糖及乳糖)则起阻遏作用；在指数生长后期至稳定早期，大量产CMC~e；发酵液 含CMC~e、滤纸酶及葡萄糖苷酶活性，以CMC~e活力最高；胞外CMC~e活力占总CMC~e 活力的74．1％左右；酶最适作用温度35℃，5℃时酶活保留50％左右；酶对热敏感，35℃半 衰期为3h，25℃下酶活稳定；酶最适pH8．0。 关键词 低温纤维素酶，耐冷，海洋细菌 北极海洋微生物进行广泛筛选的基础上，对其 中l 0 引 言 株产胞外低温纤维素酶的耐冷菌株在分类鉴定、生 长与产酶以及酶学性质等方面进行了初步研究。 自20世纪80年代中期海洋技术兴起以来，对 海洋微生物资源的开发利用逐渐成为一个热点。生 1 材料与方法 活在常年低温环境中的南、北极海洋微生物，因其特 有的低温适应机制及生理生化特性，在基础研究与 1．1 菌种 生物工程应用方面具有某些独特优势…。生成低温 低温海洋细菌分离 自北极楚科奇海表层海水， 酶是微生物的适冷策略之一。低温酶的研究与开 一 70~C保藏。 发 ，已在国内外引起了广泛关注。应用低温酶，不但 1．2 培养基 可以保证低温条件下的高效酶反应，而且在生产工 2216E培养基(蛋白胨 5g，酵母粉 lg，磷酸高铁 艺中可以通过较低温度的热处理使酶失活，节约能 0．1g，陈海水 lL，pH 自然)；初筛培养基 (添加了 量与费用。 0．5％(w／v)羧 甲基纤维素钠 (CMC)的2216E培养 纤维素酶是一类可广泛应用于医药、食品、棉 基)；LB培养基_2；细菌基础碳源培养基(NaC110g， 纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。它由 碳源 5g，Na2nP043．2g，KH2P041．3g，NAN03lg， 一 组能共同作用、分解纤维素的酶类组成：(1)纤维 Na2s040．8g，(NH4)2HPO40．5g。蒸馏水定容至 lL， 二糖水解酶 (即CBH，也称滤纸酶、外切纤维素酶， pH7．2)；细菌基础氮源培养基(NaC110g，K2I-It~47g， EC3．2．1．91)；(2)内切 l，4．J3．D．葡聚糖酶 (即CM． 葡萄糖5g，氮源5g，KH2P043g，柠檬酸钠0．5g，Mg． Case，也称羧甲基纤维素酶，EC3．2．1．4)；(3)l，4．J3． so4·7H200．1g。蒸馏水定容至 lL，pH7．2～7．4)。 D．葡萄糖苷酶 (EC3．2．1．21)。迄今为止，人们大多 1．3 产酶菌株的分子鉴定 把注意力集中在常温、高温纤维素酶的研究上，涉及 抽提细菌染色体DNAE3j。菌株 16SrDNA全长 低温纤维素酶的研究工作相对较少。 序列PCR扩增参照文献[4]进行，引物为8f：5’．