测定多环芳烃(萘与菲)的直接竞争荧光免疫分析法研究.pdfVIP

第28卷增刊 分析试验室 V01．28．su耐． ：r『)9年11日 ChineseJournalJfⅧvsisI血oralorv 2009一ll 测趸多环芳烃(萘和菲)的直接竞争荧光免疫分析法研究 庄惠生¨一，王丽丽2，周纯2 摘要：使用自制的LC标记到NA和PH的人工抗体上，建立了直接竞争荧光 x 免疫分析法测定NA和PH，测定NA标准曲线的线性范围：1．0×10～．1．0 为5．0×10一mg／n1_L，测定生活污泥，印染污泥和电镀污泥等三种污泥中的NA， 回收率为9r7．53％．107．57％。测定PH标准曲线的线性范围：1．0×10一．2．0 10-’m#mL，测定生活污泥，印染污泥和电镀污泥等3种污泥中的PH，回收率 为95．43％～104．26％。 关键词：直接竞争荧光免疫分析；萘；菲；多环芳烃 众所周知，多环芳烃具有激素作用及致癌、 致突变和致畸性【l’2]。在环境中存在的微量多环芳 矾C)，96孔酶标板(基因有限公司)，安捷伦 烃难降解，对环境产生持久性的危害，为保护环 Aglient 境和人类健康，对环境中的微量多环芳烃的监测 评价是十分重要和必要的。 皿，上海求精生化试剂仪器有限公司)，752紫外 目前，文献报道使用间接竞争荧光免疫分析 分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。 1．2实验方法 方法[31测定萘(NA)，使用荧光实时定量免疫PCR 方法【4]测定菲(PH)，但使用光色素作用荧光探针 酶标板各孔中加入100止NA或PH抗原溶 的荧光免疫分析法却未见文献报道。本文使用自 液，4℃过夜，包被酶标板；用PBsI洗涤各孔3 制的Lc标记到NA和PH的人工抗体上，建立了 次，每孔250皿，每次5rain，甩干洗涤液；酶标板 直接竞争荧光免疫分析法测定NA和PH，线性范 围较宽，灵敏度高，最低检测限分别可达5．0× mill，封闭酶标板；用PBST洗涤各孔3次，每孔 10—8 250皿，每次5rain，甩干洗涤液；酶标板各孔加入 mg／mL和1．4×10～mg／mL。 1实验部分 50止待测小分子物质和50止标记人工抗体，37 1．1试剂与仪器 ℃温育2h，用PBST洗涤各孔3次，每孔250止， 光色素、NA人工抗原、PH人工抗原、NA人每次5rain，甩干洗涤液；用荧光酶标仪测定各孔 工抗体和PH人工抗体，均为本课题组自制提纯； 的荧光强度，制作工作曲线，并进行样品测定。 NA(A．R．中国远航试剂厂)，PH(A．R．百灵微化2结果讨论 学有限公司)，牛血清白蛋白(华美生物工程公 2．1直接竞争荧光免疫的实验条件优化 2．1．1包被介质的影响根据免疫程序可知，包 司)，N一羟基琥珀酰亚胺(A．R．Signa)，1．乙基． (3．二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(A．R．上海 被是整个反应体系的第一步，其效果的好坏决定 共价化学科技有限公司)。 了接下来反应进行的效果。本实验的反应体系是 目资助 一29— 第28卷增刊 分析试验室 V01．28．Suppl．