马流感病毒青海株(A%2fEquine%2fQinghai%2f1%2f94)相关特性地研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 i i ne／Q i／1／94)相关特性的研究 马流感病毒青海株(A／Equ ngha 杨建德‘，相文华1，薛飞1，王晓均1，朱远茂。，赵立平’，吕晓玲。，沈荣显1，李景鹏2 500 30) (1中国农科院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨，150001；2东北农业大学生物工程系，哈尔滨，1 Influenza Influenza)是由A型马流感病毒(Equine 马流感(Equine 高度接触性传染病。该病主要表现咳嗽、喷嚏、发热、食欲减退，怀孕母马可发生流产。该病广泛存在 于欧洲、美洲、亚洲和非洲等地，曾给欧美及亚洲的一些主要国家造成巨大的经济损失。迄今为止，能 EIV在世界各国几乎分离不到，估计该亚型毒株可能已经灭绝或接近消失。二十世纪七十年代，在我国 ／Qinghai／1／94)。 鼠、大鼠、豚鼠和兔的感染试验进行研究，从而阐明该毒株的一些理化特性和生物学特性，为进一步研 究该毒株的特性奠定基础，也为研究其他流感病毒提供理论依据。 1材料与方法 1．1毒株：EIV青海株(A／Equine／Qinghai／1／94)由本室分离鉴定并保存。 1．2 10日龄SPF鸡胚：由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所SPF鸡房提供。 1．3健康小鼠、大鼠、豚鼠及兔：由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供。 1．4 SPF鸡抗凝皿：由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所SPF鸡房提供。 i．5 液。 囊液，测其血凝价，连续传7～8代，每一代都测其血凝价。 1．7 电镜观察：根据1．6中测得的血凝价，如果稳定在512以上时，取该代次的尿囊液，用离子捕捉 技术浓缩病毒，磷钼酸负染在电镜下观察。 分别作用10分钟和30分钟，测其血凝价。 1．9动物感染试验 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 制效价。接种后第9天迫杀，观察病理变化。 21、28，35天采血，分离血清，测其血凝抑制价。接种后第16天迫杀，观察病理学变化。 1．10血凝抑制试验(HI) 班手册(WHO 0．IM 胰酶(200mg的胰酶溶于25mi 0．01IM的过碘酸钾(230mg过碘酸钾溶于100ml 却至室温后，加入3009l 滤除茵)，混匀，室温孵育15分钟；然后加入3001J_I1％的丙三醇，混匀，室温孵育15分钟；最后加 入250910．85％的生理盐水，混匀，血清终稀释度为1：10。 分钟，静置使之分层，将含有病毒的液相转移至玻璃瓶中，放置过夜使乙醚挥发。 到12孔(A2—A12)加入50“1的PBS(pH 稀释。第8排为红细胞对照孔，每孔加1001J_I 22～2522孵育。确定对照成立后，判读结果并记录。 I．10．4 于试验的消耗。通过计算，配制溶液并记录。可以用标准抗原稀释液作一个血凝试验，以确定其血凝单 位，4℃保存，当天使用有效。 1．10．5HI试验步骤：标记96孔微量板，每板的AI-A12孔中加入25“lPBS，作为阴性对照。在 照孔加入251_LI 根据室温情况确定反应时间，使红细胞沉积。判定并记录结果。 2．结果 2．I血凝价的测定：毒株开始传代时，由于病毒保存时间较长，血凝价较低，经过连续传代，7～8代 后趋于平稳。 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 直径lOOnm，个*Ⅱ为丝状(见图1)，为典型的流感病毒形态。 图1青海株EIV形态表1实验动物感染 A／Equine／Oinghai／1／94病毒后HI抗体变化情况 试验编号 3天 5天 7天