外源性bFGF对高胆红素血症致大鼠近%2f远期脑损伤对抗作用的实验性的研究.pdfVIP

2006年全I!IJL科热点研讨会论文集 外源性bFGF对高胆红素血症致大鼠近／远期 脑损伤对抗作用的实验性研究 王昱1，朱宇熹2，孔祥英1 (1．第三军医大学附属第一医院儿科；2．重庆医科大学附属第一医院肿瘤科，重庆400038) 高胆红素血症是新生儿期的高发病症，长期以来认为无脑病表现的高胆红素血症对远期神经、精神无明 显影响的观念被流行病学等研究所打破，寻找一种有效的早期干预措施成为临床工作者研究目标。已经证 FibroblastGrowthFactor 实，碱性成纤维细胞生长因子(Basic bFGF)是一种具有多种生物活性的神经营养因 子，有可靠的促进神经再生的作用，本实验旨在利用形态学指标研究高胆红素血症对大鼠近／远期的影响，并 初步探讨bFGF的治疗作用。 1材料与方法 1．1动物模型的制作 出生1周的健康Wister大鼠80只(由第三军医大学实验动物中心提供)，体重为13．5～18．6g，雌雄不 ，l=20) RP配置方法。动物模型的制作：T1G和T2G大鼠腹腔内注 注射用胆红素溶液的配制：参照Wennberg 0．171 0．342 射胆红素溶液，剂量分别为TIG ia,mol／g(100；,g／g)，T2G、BG 物房内恒温、恒湿、避光环境中自然哺育48小时。对照组除以生理盐水0．5mL取代胆红素溶液外，其他条 件同实验组。 动物模型鉴定：48小时后，每组动物各5只，断头取脑，断头取血约0．5mL，重氮反应法测定血清胆红素 浓度；迅速取脑，取左侧海马组织4％多聚甲醛固定，用于光镜观察，取右侧海马待用；剩余脑组织称重后置 于10倍体积冰醋酸中制成10％均浆，等体积丙酮抽提，重氮反应法测定脑组织胆红素浓度。 1．2治疗方法 ①治疗组大鼠于模型制作后30分钟、1天、3天、5天、7天分别经腹腔注射bFGF(Sigma公司)，6IU／kg． mL 次，均用0．25 0．1％肝素一磷酸盐缓冲溶液稀释，对照组于腹腔内注射等量的0．1％肝素一磷酸盐缓冲 溶液，操作中严格无菌原则。 ②治疗效果鉴定：模型制作后2d，8d，28d，60d，治疗组和非治疗组动物同时断头取脑，同上送检组织 染色。 1．3 GAP43免疫组织化学染色 mol／L h，移人20％蔗糖0．1 PBS溶液脱 (1)方法：①左侧海马脑组织置于4％多聚甲醛，4℃冰箱固24 水过夜、沉底；②连续快速冰冻切片，片厚25斗m，每隔20张取切片2张；③0．3％H：0：甲醇溶液室温封闭 内源性过氧化物酶30rain；④正常山羊血清室温下孵育30 1 ：1 h，4oC冰箱过夜；⑥按ABC法操作，分别加 000，由本校神经生物教研室范晓棠博士馈赠)，37℃孵育1 入生物素结合的羊抗兔IgG，370C孵育1h和卵白素一生物素过氧化酶复合物(ABC)，37℃孵育30rain；⑦ DAB显色，免疫反应阳性物呈棕黄色；⑧酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 mol／L X一100的0．01 以上各步骤间均以含0．3％Triton PBS(pH=7．4)充分漂洗(10mira／次×3)；对照 实验：省略“一抗”，其余步骤同。 (2)GAP_43图像分析：取模型制作成功后2日龄、813龄、28日龄、60日龄，各实验组及对照组含海马部 ．67· 2006年全国儿科热点研讨会论文集