中国16个人群样本中GSTO1基因多态性的研究.pdfVIP

生垦垫直瘟堂苤查2QQ2生!!旦2Q旦星2鱼鲞￡!也』垦!i!塑i!!：盟!12Q，!!Q!，y尘：!i 2．2 MMAⅢ暴露诱导ROS依赖性eNOSS汀㈣磷酸化3讨论 Serl 和细胞内ROS产生：NAC预处理(1mmol／L)能够 179是eNOS分子两个最重要的磷酸化位 抑制MMAⅢ(0．75 点之一，其通过在Serl179基团增加一个负电荷而 txmol／L)暴露诱导的eNOS晒1n9磷 酸(图3)。DCF荧光检测法表明，MMAm(O．75 增加eNOS还原酶区域的电子流动、以及降低钙调 p。mol／L)暴露确实能够诱导BAEC产生ROS，并且蛋白一eNOS复合物解离这两个方面．引起eNOS活 MMAⅢ暴露15 也可以被NAC预处理所抑制(图片未列出)。 化。0．75Ixmol／L min后，eNOS磷酸 对照组 NAC(1 mmol／L) 化显著增加，提示MMAⅢ暴露初期可能诱导体内的 0 5 10 5 10 15(nfin)0 15(min) 滋麓霪鍪瓣蒸㈧ A瓣囊鬻麓蘸黼 是需要高浓度和更长的暴露时间．提示iAsⅢ的细胞 MMAo(0．75肛mol／L) 效应可能是通过其代谢中间产物MMAⅢ间接作用 2．O 的结果。 1．6 实验中，MMAⅢ诱导的eNOS磷酸化能够被抗 1．2 B 7有效抑制，提示内皮细胞产生的ROS O．8 氧化剂一NAC 0．4 可能发挥作用。进一步应用DCF荧光检测法观测到 O MMAⅢ暴露产生的荧光，并且这种荧光也可以被 MMA“fO．75 I．LmoI／L) A：WesternBlot的典型结果；B：定量结果；＆与对照组比较，P0．05； 。酸化具有ROS依赖性。 ． +与MMAo组比较．PO．05：”P0．01 砷与巯基蛋白结合形成砷一巯基蛋白复合物 图3．NAC预处理抑制MMA“暴露诱导的eNOSs。，。磷酸化 而改变巯基蛋白的生物学活性一直被认为是砷的 2．3 MMAⅢ一DTr复合物暴露对eNOSs。。，为磷酸化 毒性机制之一。为进一步探讨MMAⅢ诱导eNOS磷 和ROS产生的影响：MMAⅢ一DTF复合物(0．75 酸化的机制，作者还观察化学合成的MMAⅢ一DTI panol／L．0～15min)暴露不能诱导eNOS磷酸化和 复合物对内皮细胞eNOS磷酸化和ROS产生的影 细胞内ROS产生(图4)。 MMA“(O．75 响。结果表明，在相同实验条件下，MMAⅢ一DTF复合 p．．mol／L) MMA“DTr(0．75I-Lmol／L) 0 5 10 5 lO 15(rain)0 15(min) 物暴露不能诱