杏花花粉醇提物的抗氧化性和对酪氨酸酶抑制作用的研究.pdfVIP

中国营养学会营养与保健食品分会第五届学术研讨会 杏花花粉醇提物的抗氧化性及对酪氨酸酶抑制作用的研究 董捷12李洁3张红城12+尹策12李春阳4 1中国农业科学院蜜蜂研究所，北京，邮政编码100093 2农业部国家蜂产品加工专业分中心，北京，邮政编码100093； 3北京市疾病预防控制中心 4．江苏省农科院农产品加工研究所，南京，邮政编码210014 本文研究了杏花花粉醇提物的抗氧化性并与从中提取的苦杏仁苷的抗氧化性作了比较。 通过总抗氧化能力的实验来测定是否具有清除各种自由基能力，通过还原力的实验来测定是 否具有在自由基生成阶段抑制自由基生成作用，通过清除DPPH自由基的实验来测定是否具有 在自由基连锁起始反应阶段抑制作用，通过清除羟自由基和抑制脂质氧化的实验来测定是否 具有在连锁成长反应阶段抑制作用。本文也研究了杏花花粉醇提物对酪氨酸酶的抑制作用， 确定杏花花粉醇提物是否具有美白功效。 1材料与方法 1．1 材料与设备 1．1．1材料与试剂 30％过氧化氢，硫酸亚铁，硫代巴比妥酸，抗坏血酸，大豆卵磷脂，三氯乙酸，铁氰化钾， 三氯化铁，浓盐酸，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，均为分析纯，DPPH(Sigma) 苦杏仁苷标准品：批号820．200002中国药品生物制品检定所。总抗氧化能力测定试剂盒： 批京建成生物工程研究所。羟自由基测定试剂盒：批京建成生 物工程研究所。【广酪氨酸，酪氨酸酶(Sigma)。杏花花粉：中国农业科学院蜜蜂研究所提供 1．1．2仪器与设备 HZS．H型水浴振荡器(哈尔滨市东明医疗仪器厂)UV-2100型紫外可见分光光度计 (UNICO)PL303型电子分析天平(METTLERTOLEDO)TDL-5型低速离心机(上海安亭 科学仪器厂) MSl型漩涡混匀器(Il(A)SY21．K型电热恒温水浴锅(北京长风仪器仪 表公司) KQ．50DB型数控超声波清洗器(昆山是超声仪器有限公司) 1．2方法 1．2．1样品的制备 取杏花花粉用无水乙醇进行提取，将提取液室温浓缩干燥、称重，该固体为杏花花粉醇 提物。另将提取液放入．20C冰箱冷冻结晶24小时，离心得到结晶上清液和苦杏仁苷结晶物。 将结晶上清液室温浓缩干燥，该固体为结晶上清物。 分别将三份固体用无水乙醇溶解，制备成不同浓度的样品溶液。 1．2．2测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷总抗氧化能力 制备不同浓度的样品溶液，依照总抗氧化能力测定试剂盒方法进行测定，按试剂盒提供 的公式计算总抗氧化能力。 89 中国营养学会营养与保健食品分会第五届学术研讨会 倍数 1．2．3测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷的还原力州 向不同试管中加入100ul不同浓度的样品(空白加100ul无水乙醇)，用蒸馏水定容至 lml，依次加入2．5mlPH6．6 下测定吸光值，计算还原力。 还原力=(A样品．A空白)／A空白×100 1．2．4测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷清除DPPH自由基能力【5】 用无水乙醇作溶剂制备0．2mmol／L的DPPH溶液。向不同试管中加入200ul不同浓度的 室温避光静置30min，在517nm下测定吸光值，计算抑制率、IC，o。 抑胄0率=(A空白．A样品)／A空白×100 IC50：当抑制率达到50％时所需抗氧化剂的量。 1．2．5测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷抑制羟自由基能力 制备不同浓度的样品溶液，依照羟自由基测定试剂盒方法进行测定，按试剂盒 提供的公式计算抑制羟自由基能力。 取样量×样本测定前稀释倍数 1．2。6测定杏花花粉醇提物、结晶上清物、苦杏仁苷抑制卵磷脂氧化能力【6】 PH7．4 以10mrnol／L PBS为溶剂配制10mg／rm的卵磷脂溶液。显色剂：取159三氯乙酸、 硫酸亚铁、35mgVc定容至25ml。 向不同样品测定管中加入卵磷脂溶液200ul(样品对照管不加)、200ul不同浓度的样品 37 在532nm下测定吸光值。计算抑制率、IC50。 抑铝0率=(A空白对照．(A样品潮定．A样品对照))／A空白对照×100 1．2．7测定杏花花粉醇提物对酪氨酸酶的抑制作用【『7】 1．2．7．1 酪