棒状链霉菌蛋白质样品提取方法及双向凝胶电泳条件的优化.pdfVIP

中国抗生素杂志2009年 10月第34卷第 10期 ·609 · 文章编号：lOOl-8689l2009)10-0609-08 棒状链霉菌蛋白质样品提取方法及双向凝胶 电泳条件的优化 王美龙 王永红一 银鹏 张嗣良 冯涛 夏月兰 (华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室， 上海200237) ‘ 摘要： 针对基于工业用复合培养基的棒状链霉菌 (Streptomycesclavuligerus)发酵液杂质含量高特性，对蛋白质样品制备 、第一 向等电聚焦和第二向SDS—PAGE电泳相关的主要实验条件进行了研究和优化。所得最适条件为：采用液氮研磨方法破碎细胞 ，用 10％的TCA／丙酮沉淀法除盐，用含有7moL／L尿素，2moL／L硫脲 ，2％CHAPS，20mmol／LDTI，0．5％IPG缓冲液 (pH3～10)的溶 胀液重悬蛋白，应用pH梯度为4—7，长度为24cm的固定化胶条进行第一向等电聚焦 ，浓度为 12．5％的聚丙烯酰胺凝胶进行第二 向SDS—PAGE，考马斯亮蓝 R-250染色，上样量为600p,g。对获得的双向电泳图像运用 ImageMaster2DPlatinum软件进行分析表明 成功建立了重复性好的基于复合培养基的棒状链霉菌蛋白质样品制备和双向电泳方法，为工业规模克拉维酸发酵过程蛋白质组研 究奠定了基础。 关键词： 棒状链霉菌 ； 双向电泳； 蛋 白质组学 中图分类号：Q935，Q51 文献标识码：A Establishmentandoptimization ofprotein extractionandtwo-dimensionalgel electr0ph0resis(2-DE)methodforStreptomycesclavuligerusproteome WangMei-long， WangYong—hong， YinPeng， ZhangSi·linag， FengTao and XiaYue—lan (StateKeyLaboratoryofBioreactorEngineering，EastChinaUniversityofScienceandTechnology，Shanghai200237) ’ ABSTRACT InthepresentpapertheprotocolsforsolublecellularproteinextractioninStreptomycesclavuligerus grownoncomplexmediumandtwo—dimensionalgelelectrophoresisf2一DE)wereinvestigatedandoptimized．Themain resultswereasfollowed：gnndingwithliquidnitrogentodisruptcells，10％ TCA／acetoneprecipitationtomakeprotein desMted，using0．5％ IPGbuffer(pH3～10)，7mol／Lurea，2mol／Lthiourea，2％ CHAPS，20mmol／LDTItore— dissolveproteinsample，IEFwithimmobilizedpHrgadients(4～7)gelasthefirstdimensionelectrophoresis，12．5％ SDSasthesecond，sampleamount600 g，stainedwithCoomassieblue．Th efine2一DEpatternofStreptomyces clavuligeruscellularproteinwith highresolutionandreproducibilitywasobtmned． KEY W ORDS Streptomycesclavulige ； Two—dimensionalelectrophoresis； Proteomics 1975年 O’Farr