微生物发酵法生产胞嘧啶核苷的研究进展.pdfVIP

发 酵 科 技 通 讯 第39卷 微生物发酵法生产胞嘧啶核苷的研究进展 方海田 谢希贤 徐庆阳 陈宁 (天津科技大学生物工程学院 工业微生物教育部重点实验室 天津 300457) 摘 要 ：胞嘧啶核苷又名胞苷 ，其在食品工业和医药行业上应用广泛。简单介绍 了国内外微生物发 酵法生产胞嘧啶核苷的方法；重点阐述 了胞苷生产菌种的选育研究进展等，并以胞苷生产菌的选育为 例 ，根据代谢控制发酵原理和基因重组技术，对胞嘧啶核苷生产菌枯草芽孢杆菌与大肠杆菌的育种实例 进 行 了综述 。 关键词：胞苷 发酵 菌种选育 进展 嘧啶核苷包括尿嘧啶核苷和胞嘧啶核苷。胞 法和合成法相结合以尿嘧啶为前体发酵，得到的 嘧啶核苷(cytosineriboside)X名胞苷(cytidine)、胞 尿苷再通过化学法转化为胞苷。目前国内外制备 啶、1-13一D一呋喃核苷胞嘧啶 l。嘧啶核苷是多用 胞苷的方法主要是化学合成法 ，即以胞嘧啶和核 途 的核苷 ，嘧啶核苷 的医用价值较广泛 ，在美 国， 糖或者 以尿苷为主要原料进行制备，但存在反应 核酸类药品近年来在抗病毒、抗肿瘤、治疗艾滋病 步骤多，反应条件苛刻、操作繁琐、环境污染较大 药物方面显示了不可替代的作用。胞苷作为嘧啶 和原料成本高的问题。而用微生物发酵法生产胞 核苷，主要用于生产抗肿瘤 、抗病毒药物的中间 苷，具有条件简单 、成本低 、产率高、周期短 、控制 体 ，是制造阿糖胞苷 (Ara—CR)、环胞苷 (CycloC)、 容易等优势。嘲近年来 ，利用微生物发酵法生产胞 三磷酸胞苷(CTP)、胞二磷胆碱(CDP—Choline)等药 苷成为研究的热点 ,61。 物的主要原料 。随着抗病毒 、抗肿瘤 、治疗艾滋 1．1 直接发酵法 病药物研制的深入，对天然嘧啶核苷的需求量加 直接发酵法是借助于微生物具有合成 自身所 大 ，人们期望得到廉价的、能大规模生产胞苷的工 需核苷的能力 ，通过对特定微生物的诱变处理，选 艺方法。于是 ，发酵法生产胞苷的研究也 日益得到 育出营养缺陷型及核苷类似物抗性突变株，以解 更广泛的重视l3,41。而发酵法采用选育技术获得的 除代谢调节中的反馈抑制和反馈阻遏 ，从而达到 菌株能够大规模且单一地生产胞苷 ，大大降低了 在发酵过程中积累嘧啶核苷的 目的，具有发酵条 生产成本 ，因此加快对发酵法生产胞苷的研究，对 件简单、周期短、易控制、产率高和产量大等突出 提高我国核苷发酵在国际市场上的竞争能力有着 优点。 重要意义。 1．2 添加前体物发酵法 利用核苷酸生物合成途径的补救途径 ，通过 1 嘧啶核苷 的生产方法 在核苷生产菌的培养基 中添加前体物尿嘧啶，使 嘧啶核苷的生产方法主要有 RNA化学水解 嘧啶碱基通过补救途径直接合成核苷 ，从而增加 法和发酵法 。传统的嘧啶核苷生产方法是使用 尿苷的生成量。由二次诱变的尿嘧啶缺陷型的枯 RNA经化学方法水解 ，然后制备 2种嘧啶核苷， 草芽孢杆菌在添加尿嘧啶的培养基中可大量积累 这不仅需要大量的优质 RNA原料，而且2种嘌呤 胞苷[31。 核苷及 2种嘧啶核苷都必须产销平衡 ，否则成本 1-3 通过基 因重组技术构建胞苷生产菌进行发 很高，