植物愈伤组织培养实验设计方案.docVIP

植物愈伤组织培养实验设计方案 组员：陈林超、陈思超、杨芳、徐国政、萧宇超、郑剑 一、实验目的： 1、掌握培养基配制方法及灭菌技术 2、掌握外植体灭菌的基本方法以及无菌操作技术 3、掌握实验结果的统计方法并学会分析 二、实验原理： 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。愈伤组织是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。电子天平称量纸、、皮筋、、记号笔（或标签纸）、高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、人工气候箱75% 酒精HCl、NaOH、大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、铁盐母液、无菌水、0.1%HgCl2、乙醇、蔗糖、琼脂、6-BA、NAA 3、实验材料：月季、仙人掌、芦荟 实验步骤： 1、各种实验器材的准备及清洗 2、各种母液的配置： 类型 成分 培养基中 配置母液 母液体积 配1L培养基 扩大倍数 工作液 称取量g ml 吸取量/ml 浓度mg/L 大量元素 NH4NO3 1650 16500 　　KNO3 1900 19000 　　CaCl2·2H2O 　　MgSO4·7H2O 　　KH2PO4KI 0.83 83 　　H3BO3 6.2 620 　　MnSO4·4H2O 　　ZnSO4·7H2O 8.6 860 1000 10 100　　Na2MoO4·2H2O 0.25 25 　　CuSO4·5H2O 　　CoCl2·6H2O 铁盐 FeSO4·7H2O 27.8 2780 1000 10 100 　　Na2-EDTA 37.3 3730 有机物质 肌醇 　烟酸　　 盐酸吡哆 　　盐酸硫胺素 　　甘氨酸1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调整pH至5.—5.8，最后在搪瓷杯中用蒸馏水定容至1L。 培养基的分装： 将1L的MS培养基分装到4个250ml的锥形瓶中，分别配成四个组的专属培养基，并各自倒入10个25ml的小锥形瓶中，用2层牛皮纸包好并用皮筋扎好，最后用记号笔做好记号 1）对照组：MS培养基，不加任何激素 2）月季： MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L 3）仙人掌：MS+ 6- BA 2.0 mg/ L+ NAA0. 2mg / L 4）芦荟： MS + 6-BA 1.0 mg/L+ IBA 0.1 mg/L 材料预处理： 1）月季： 选取其生长健壮的当年生枝条，有饱满而未萌发的侧芽，剪去顶部和基部 并去叶，用洗衣粉水溶液轻轻洗涤，放到烧杯中流水冲洗 2）仙人掌：选择大小适中的仙人掌放入烧杯中流水冲洗 芦荟：选取芦荟3 年生带花植株, 放到烧杯中用流水冲洗 30min后倒置烧杯，使多余的水流出，拿掉纱布后用吸水纸吸干植株外表面的水分， 最后放入已消毒好的超净工作台中 灭菌： 培养基及器具灭菌培养基、无菌水需要在高压灭菌锅中灭菌。灭菌作用取决于温度，常用的灭菌温度为121℃，灭菌结束后待温度下降到50℃以下，才能取出 已灭菌的培养基。可用同样方法对器具同时进行灭菌，包括：培养皿、解剖刀、 剪子、滤纸、镊子等。  2工作环境灭菌  接种前1ｈ打开超净工作台和棚面的紫外灯照射40min。杀菌结束后，先关掉 棚面的紫外灯，再打开风机，最后关掉超净工作台上的紫外灯。在接种后休息 时，要先打开台面的紫外灯，再关风机，最后打开棚面紫外灯。不能将风机与 台面上的紫外灯同时关闭或先关闭风机再开紫外