测定纤维素酶活实验方法总结及优化方案.docVIP

DNS法测定酶活实验方法总结及优化方案 目前纤维素酶没有统一的测定方法，诸多因素影响纤维素酶酶活测定大小的比较。选择适宜的酶活测定条件，提高测定结果的准确性，可根据有关资料中采用的测定条件，以及通过控制变量法对酶活力测定中的主要影响因素进行研究。 目前实验室采用测酶活方法： 1、葡萄糖标准曲线制作： 试管号 1 2 3 4 5 6 1mg/ml葡萄糖标准液/ml 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水量/ml 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 葡萄糖浓度/mg/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 PH4.8磷酸氢二钠-柠檬酸/ml 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 DNS试剂/ml 3 3 3 3 3 3 沸水浴7min后快速冷却加入蒸馏水/ml 5 5 5 5 5 5 530nm比色。 2、酶活测定方法： 管号 空白管0 样品管1 样品管2 酶液/ml 0.5 0.5 0.5 沸水灭活10min 1%CMC-Na/ml 1.5 1.5 1.5 45℃下反应30min，沸水灭活10min DNS试剂/ml 3 3 3 沸水浴中7min显色快速冷却后 蒸馏水/ml 5 5 5 考虑到酶液中培养基成分会对吸光值造成一定的影响，所以空白管0还是采用先将酶高温灭活的方法，后面保持实验条件一致，显色时间与标准