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PCR 检测的质量控制 孙 明 博士 北京世纪元亨动物防疫技术有限公司 随着兽医防疫工作重要性的逐步提高，PCR 检测技术已被兽医工作者比较广泛认可， 已经从实验室研究走进了临床应用阶段。如何提高PCR 检测质量，已成为实验室技术人 员不可回避的一个问题，它直接影响实验室检测结果的可信度和兽医防疫工作质量。 我们认为，PCR 检测质量的控制是一个系统工程，总体上涉及三个方面：一是试验仪 器；二是试验试剂与耗材；三是人员操作。任何一个方面出现问题，都会影响PCR 检测 质量。 一、试验仪器 PCR 仪和紫外凝胶成像系统（紫外分析仪或手提紫外等）以及移液器都可能影响PCR 检测的质量。PCR 仪是控制PCR 反应温度变化的，其温度和控制时间的准确程度可能会 影性PCR 检测质量。移液器取液的准确程度影响反应体系是否能达到最佳反应环境。紫 外分析系统对检测敏感性有明显的影响。紫外分析系统有3 种类型仪器：紫外分析仪、紫 外凝胶成像系统、手提紫外灯。紫外分析仪直接用眼睛观察琼脂糖凝胶上DNA 扩增带。 紫外凝胶成像系统是在计算机上通过摄像系统对琼脂糖凝胶上DNA 扩增带进行观察。手 提紫外灯可以在电泳过程中直接对琼脂糖凝胶上DNA 扩增带进行观察，使用方便，分辨 率比较低。依据这些仪器的分辨率由高到低顺序是紫外分析仪、紫外凝胶成像系统、手提 紫外灯。紫外分析仪有时能看到弱阳性扩增带，在紫外凝胶成像系统上却看不到。手提紫 外灯只有在阳性扩增带比较亮时才能看到，建议为保证检测质量最好不用手提紫外灯，可 用于临时的电泳结果观察。 仪器的质量控制应该通过实验室质量认证来实施，定期进行仪器的效验。没有质量认 证的实验室可以定期请仪器生产厂家进行效验和保养，确保所有仪器处于正常的工作状 态。 二、试验试剂与耗材 在PCR 检测质量控制中，试剂的选择具有十分重要的作用，也是实验人员最为关注 的检测质量控制因素。试剂一定选择质量和信誉好的厂商，一但选定后最好不要轻易改换。 如果必须改换时应与原产品进行严格比对试验，包括敏感性、特异性、试剂保存期等试验。 并且经常要注意不同批次产品质量的差异。比如说 TaqDNA 聚合酶，不同厂家生产的质 量是有差异的，尽管都是标出相同活性单位，但其标定方法和保存液的成分以及运输过程 的不同常常导致实际活性单位是有差异的，有时由于其活性低，使得弱阳性样品漏检；有 service@100 时由于其活性过高出现非特异扩增。这与ELISA 检测中酶结合物的作用相似。其实影响 PCR 检测结果的试剂很多，可以这样说，PCR 检测用的所有试剂都可能影响检测效果。 控制试剂的质量是作好PCR 检测前提。我们认为：最好是选择PCR 试剂盒来控制试剂质 量。 评价一种PCR 试剂盒，除了考虑它的敏感性、特异性、稳定性、操作简便程度外， 还应包括：试剂盒提供的试剂覆盖整个PCR 检测试验的程度。如果试剂盒提供了整个PCR 检测试验的试剂，表明该试剂盒对PCR 检测试验的试剂具有了全程控制性能。相反，PCR 检测的试剂的质量控制程度比较低，意味着检测质量可控程度低。例如：溴化乙锭仅仅起 荧光染料的作用，如果在阳光下长时间的照射下失效了，在紫外灯下发荧光效能降低，可 能会造成一些弱阳性样品的漏检，出现假阴性。其它试剂出现问题也是一样影响检测质量。 试剂盒在生产过程中，有一套试剂生产质量控制体系。每一试剂组分都经过灵敏度、敏感 性、特异性质量控制的检测，在有效期内能确保每种试剂的质量。因此，选择试剂盒进行 PCR 检测是比较理想的控制方法。在PCR 检测中，最好全部使用试剂盒提供试剂，对PCR 检测质量控制有益。 实验耗材也是影响PCR 检测质量的因素之一。PCR 反应管薄厚以及传导热量性能等 直接影响PCR 检测效果。在热盖PCR 仪上一般不需要加入矿物油，但有些PCR 反应管 盖子不严密，导致扩增过程中反应液水份蒸发，严重影响检测灵敏度。PCR 反应体系是 微量的，移液器的Tip 头生产质量不好时，有时致使液体残留量多或洪吸作用强，导致试 剂盒中试剂量不够，配置PCR 反应体系不准，造成检测质量下降。 在每次PCR 检测时，一定设立阴性对照样品和阳性对照样品。阴性对照样品检测为 阴性时，