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PCR 自动检测系统及其数据分析软件设计 PCR Autodetection System and Its Data Analysis Software 黄斌 凌志浩 Huang,Bin Ling,Zhihao 摘要： 本文简述了PCR基本原理以及模板扩增方法，介绍了PCR检测系统的整体构成，描述了信号检测的 A/D接口电路，讨论了数据分析软件的设计原理，并对两种分析方法的特征和对结果的影响做了比较分析。 关键字： 聚合酶链反应； 信号检测； Ct 值； 标准曲线 中文分类号：TP274.5 文献标识码：A 文章编号： Abstract : The principle of PCR and the method of amplification of PCR template are introduced firstly. Then the composition of PCR detection system is presented. The A/D interface circuit of signal detection is described. The design principle of data analysis software is discussed. The features and the implication on the results of two different data analysis methods are compared in detail finally. Key words: Polymerase Chain Reaction; Signal Detection; Cycle threshold; Standard curve 1 引言 现代生物化学与分子生物学是在生物化学、遗传学、微生物学、生物物理学、免疫学以 及信息科学相互渗透融汇的基础上发展起来的，已经成为生命科学和医学中的前沿学科。 PCR (Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)可以非常简便快速地采取体外扩增 的方式从微量生物材料中获取大量特定的遗传物质，所以被迅速应用到生命科学、医学研究、 遗传工程、SARS 等疾病诊断以及法医和考古学等领域，被称为分子生物学实验技术发展的 里程碑。 PCR 技术原理是将待扩增的 DNA 做模板，用来与模板正链和负链互补的两种寡聚核苷酸 做引物，经过模板 DNA 的变性、模板与引物结合复性以及在 DNA 聚合酶作用下发生引物链延 伸反应等三步循环来扩增两引物间的 DNA 片段。每一循环的 DNA 产物经变性后又成为下一个 循环的模板 DNA。整个工作过程需要在三种不同温度下（即变性、退火、延伸）循环完成， 每经历一次循环可使基因增加一倍，经过 30 次左右的循环，最终使基因扩增 100 万倍以上。 根据扩增原理，扩增是呈指数增长，因此在反应体系和反应条件相同的情况下，样本含 量与扩增产物的对数成正比，故在一定的条件下荧光强度和样本含量成正比。实时荧光 PCR 自动检测系统就是利用对荧光信号的检测来监测整个 PCR的扩增过程，以获得在线描述 PCR 过程动力学曲线。这样可将扩增和检测合二为一，降低传统方法过多人为因素的影响，提高 检测的自动化水平。 2 系统结构 荧光定量 PCR 检测系统采用荧光实时检测方式来分析 PCR 模板的扩增，系统采用热导体 加热技术来实现 PCR 检测所需要的循环过程，并通过高灵敏度的光电系统对荧光信号进行检 测。图 1 所示是完整 PCR 检测系统的基本组成，主要有如下三部分： PCR检测系统上位机运行及 分析软件 PCR检测系统上位机 标准RS232 PCR检测系统上位机 接口线 PCＲ检测系统下位机 PCR检测系统 核心部件 扩增仪 主机（WINDOWS操作系统）