SHP-1基因在慢性髓性白血病疾病进展中的作用及机制研究.pdfVIP

·1074· ·论著· SHP一1基因在慢性髓性白血病 疾病进展中的作用及机制研究 李英华王兴哲杨琳潘玉夏 尚银涛 罗建民 【摘要】 目的探讨SHP．1基因表达与启动子甲基化状态在慢性髓性白血病(cML)疾病进展中 的作用及其机制。方法SYBRGreen荧光定量PCR及Westernblot方法检测94例CML患者骨髓或 外周血单个核细胞中SHP一1基因的表达；甲基化特异性PCR(MSP)方法检测SHP一1基因启动子区CpG 岛的甲基化状态；慢病毒表达载体感染K562细胞使SHP一1基因过表达，CCK一8法检测细胞增殖活性， 流式细胞术检测细胞的凋亡率及细胞周期分布；荧光探针定量PCR检测BCR．ABLmRNA水平， Western blot方法检测蛋白及磷酸化蛋白的水平。结果疾病进展期CML(包括加速期和急变期)患者 SHP．1 0．009)，疾病进展期CML患者SHP．1蛋白相对表达水平(0．57士0．02)较CP．CML患者降低(1．02士0．04) (P=0．039)。CP—CML患者SHP一1基因启动子的甲基化阳性率(10／42，23．8％)明显低于疾病进展期 K562一EGFP细胞相比，增殖受抑，凋亡率增加，并出现G0／G．期的细胞阻滞。过表达SHP一1基因降低 K562细胞中BCR—ABL蛋白的水平，但不影响BCR．ABLmRNA的转录；过表达SHP．1基因能降低 K562细胞MYC蛋白及磷酸化Akt、MAPK、JAK2、STAT5蛋白的表达水平，而对K562细胞中Akt、 MAPK、JAK2蛋白总表达水平无影响。结论SHP一1基因启动子CpG岛甲基化及其基因沉默导致 BCR—ABL、Akt、MAPK、JAK2、STAT5、MYC信号通路的异常激活与表达可能与CML疾病进展有关。 【关键词】 白血病，髓系，慢性，BCR-ABL阳性；疾病进展；基因，SHP．1；DNA甲基化； K562细胞 SHP-1inthedisease ofchronic leukemiaLi gene progressionmyeloid Hnghua，WangXingzhe，场愕 Second Hebei Lin，Pan Yintao,Luo ofHematology,the Yuxia，Shang Jianmin+．*Department Hospitafof Medical 050000,China University,KeyLaboratoryofHematology,HebeiProvince，Shi]iazhuang anthor：Luo CorrespondingJianmin．Email：luojm315(国，卯．corn To the and ofSHP一1 【Abstract】0bjeetiveprofile investigate ofpromotermethylationexpression inthe of chronic leukemia(CML)．MethodsThe 1evelofSHP一1 gene progression myeloid expression mRNA in and bonemarrowor bloodmononuclearcellsfromCML were protein peripheral patients detectedbvWestemblotandSYBRGreen．based statusofSHP一1wereassessed qRT-PCR．Themethylation