ProgressofDigitalPCRforSingleDNAQuantification基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2012, 39(10): 1017~ 1023 于数字PCR 的单分子DNA 定量技术研究进展* 1)**,*** 1)** 1) 1) 2) 李亮 隋志伟 王 晶 臧 超 余笑波 1) 2) ( 中国计量科学研究院，北京 1000 13； 浙江省计量科学研究院，杭州310013) 摘要 数字PCR 是一项针对单分子目标DNA 的绝对定量技术 该技术是将含有DNA 模板的反应溶液分配到大量独立的反 应室中并且发生扩增反应，通过统计反应室 的阳性信号来定量DNA 的拷贝数 DNA 样品在反应室 随机和独立分布是单 分子成功扩增和准确定量DNA 拷贝数的关键因素 本文综述了数字PCR 的发展历史、数字PCR 与实时荧光定量PCR 的 别，以及数字PCR 在临床诊断、转基因成分定量、单细胞基因表达、环境微生物检测和下一代测序等方面的最新进展，并 展望了该技术的应用前景 关键词 数字PCR，绝对定量，实时荧光定量PCR，拷贝数，单分子 学科分类号 Q7 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 12.00003 核酸的序列、多样性和丰度分析是现代生物学 毛细管进行了微升( l)级的PCR 反应，通过荧光探 的基础 核酸定量技术在诊断和个体化医疗、食品 针收集到基因组DNA 的单分子信号，进而发展了 [8] [3] 检验和转基因生物检测、病原体鉴定、法医科学等 单分子定量技术 1999 年, Vogelstein 和Kinzler 方面已被广泛应用，同时这些应用也推动了核酸定 基于以上报道采用96 孔板系统发展了微升级的 量技术的进步[1] PCR 扩增方法，用于结肠癌的致癌突变基因 的 ras DNA 分子扩增技术的应用促进了分子生物学 定量分析 随之 ，Dressman 等发 明了一种 [2] [9] 技术的发展 精确定量DNA 拷贝数是现代分子 BEAMing 方法(珠子、乳剂、扩增与磁力) ：将链 生物学和医学的重要应用之一 数字PCR (digital 霉亲和素与磁珠共价结合，磁珠外包裹一层生物素 polymerase chain reaction，dPCR)作为DNA 定量的 的PCR 引物，进行扩增反应 反乳化作用后，使 [3-4] 用流式细胞仪通过磁珠分析等位基因变异 尽管步 新技术 ，克服了实时荧光定量 PCR (real time quantitative PCR，qPCR[5]) 的一系列缺点，实现了 骤较多，该技术仍不失为广泛应用于实验室定量 单分子DNA 绝对定量 dPCR 是将单个DNA 样品 DNA 的理