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酶的分离与纯化注意事项.ppt
酶的分离与纯化注意事项及酶分离纯化为什么进行酶活力和酶比活力测定;酶的提取、分离纯化技术路线;酶的纯化过程,约可分为三个阶段:
(1) 粗蛋白质 (crude protein): 采样 → 均质打破细胞 → 抽出全蛋白,多使用 盐析沉淀法;可以粗略去除蛋白质以外的物质。
(2) 部分纯化 (partially purified): 初步的纯化,使用各钟 柱层析法。
(3) 均质酶 (homogeneous): 目标酶的进一步精制纯化,可用制备式电泳 或 HPLC。;酶的提取是指在一定的条件下,用适当的溶剂或溶液处理含酶原料,使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。也称为酶的抽提。
酶提取时首先应根据酶的结构和溶解性质,选择适当的溶剂。一般说来,极性物质易溶于极性溶剂中,非极性物质易溶于非极性的有机溶剂中,酸性物质易溶于碱性溶剂中,碱性物质易溶于酸性溶剂中。
酶都能溶解于水,通常可用水或稀酸、稀碱、稀盐溶液等进??提取,有些酶与脂质结合或含有较多的非极性基团,则可用有机溶剂提取。 ;酶提取过程中应注意事项 :;在酶的提取过程中,为了提高提取率并防止酶变性失活,须注意以下几点:;酶活
酶的比活力;在酶的分离纯化过程中为什么进行酶活力及酶比活力测定
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