基于ESI-CID-MS-MS离子碎片峰特征的香菇多糖水解机制及系列香菇寡糖的制备.pdfVIP

Vol.35 高等 学校 化 学 学报 No.11 2014年11月 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 2329~2334 doi:10.7503/ cjc 基于ESI-CID-MS/ MS离子碎片峰特征的 香菇多糖水解机制及系列香菇寡糖的制备 1 3 2 1 张洪涛 ,朱 莉 ,张 爽 ,詹晓北 (1. 江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室, 2. 食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122;3. 江苏瑞光生物科技有限公司,无锡214125) 摘要 将香菇多糖和0.02 mol/ L三氟乙酸(TFA)溶液按照1mg:200 μL 比例混合并于100 ℃水解,然后利 用快速蛋白液相色谱(FPLC)技术对分别水解2,4,6 h 的水解产物中不同聚合度寡糖的组成与丰度进行分 析,从而确定最佳水解时间;用确定的最佳时间对水解残留多糖重复水解3次,直至多糖沉淀消失为止,然 后分别对水解产物进行FPLC分离并依次收集每批次的七糖. 对七糖进行ESI-CID-MS/ MS分析,结合β-1,3- 二糖、七糖及β-1,6-葡聚寡糖二糖的ESI-CID-MS/ MS质谱特征,可获得每次水解产物中寡糖的结构信息,进 而获得香菇多糖的水解机制;最后用P4凝胶柱对水解产物进行色谱分离,获得具有不同聚合度的全序列寡 糖. 结果表明,香菇多糖的最佳水解时间为4 h,在不同批次的水解过程中香菇寡糖的结构由β-1,3/ 1,6-寡 糖过渡为纯β-1,3-寡糖. 关键词 香菇多糖;葡聚寡糖;水解机制;电喷雾碰撞诱导串联质谱 中图分类号 O629.1 文献标志码 A [1] 对葡聚糖尤其是β-葡聚糖的功能进行研发是功能糖研究领域的一个重要组成部分 . β-1,3/ 1,6- [2] 葡聚糖的结构与免疫和抗肿瘤活性关系已成为生物化学领域研究的热点之一 . β-1,3/ 1,6-葡聚糖可 [3] 通过与免疫系统信号蛋白进行识别进而激活免疫系统实现其生物学功能,如Brown等 发现Dectin-1 [4] 与β-1,3/ 1,6-葡聚糖识别后可以激活免疫系统,增强机体免疫力 ;CR3 与β-1,3/ 1,6-葡聚糖结合可 [5] [6] 以激活免疫系统,进而杀死肿瘤细胞等 ;并且不同结构的葡聚糖的功能与活性明显不同 . 在加强 功能因子的构效、量效关系及其作用机理研究已经成为寻找和发现新的功能糖食品添加剂的主流趋势 [7] 下 ,研究葡聚糖功能单元的构效关系规律成为发现功能糖新功能的基础,同时也是通过对葡聚糖进 行降解、修饰及衍生化,从而获得新型、高效功能寡糖的关键. 目前,构效关系的不明确已令葡聚糖的研究进入瓶颈阶段,严重阻碍了其新型功能糖的开发、创 制与筛选. 以抗肿瘤葡聚糖为例,研究者仅发现葡聚糖糖苷键类型直接决定β-1,3/ 1,6-葡聚糖的抗肿 瘤活性. 此外,β-1,6支链的类型、在糖链上的分布及其取代度均对β-1,3/ 1,6-葡聚糖的抗肿瘤活性有