细胞色素P450 2C9新突变1400T＞C的发现及体外酶活性研究.pdfVIP

生堡医堂苤查!!!!生!!旦堑旦箜塑鲞筮坐塑盟!!!M型』堡!i堕：堕!!!里!竺堑：!!!!：!!!：!!：型!：丝3537 ．基础研究． 2 细胞色素P450C9新突变1400TC的发现 及体外酶活性研究 戴大鹏 李传保 王双虎耿培武 胡国新蔡剑平 【摘要】 目的 明确1例华法林高敏感患者细胞色素P4502C9酶(CYP2C9)的新突变及其生 物学功能。方法提取患者基因组DNA，PCR产物利用直接测序法对CYP2C9、维生素K环氧化物 还原酶复合物l(VKORCI)及细胞色素P4504F2酶(CYP4F2)基因进行序列测定，与国际数据库比对 3、+13及新突 分析确定是否存在碱基突变。通过定点诱变方法获得3种典型缺陷型CYP2C9+2、t Baculovirus 变型CYP2C9的cDNA，利用Bac．to．Bac ExpressionSystem试剂盒，获得高表达各型 CYP2C9变异体的昆虫微粒体。Western印迹法进行CYP2C9蛋白定量，以甲苯磺丁脲为探针底物药， 体外测定不同药物浓度下各型CYP2C9变异体的最大反应速率(V…)和米氏常数(K。)，评价新突变 类型对CYP2C9体外代谢活性的影响。结果患者CYP2C9基因中发现全新的突变类型：1400TC， 可导致CYP2C9第467位氨基酸发生变异(L467P)，VKORCl及CYP4F2基因无碱基突变。体外代谢 实验结果显示，突变体CYP2C9％2、$3、$13和L467P的体外酶学活性分别为野生型的91．58％、 13．55％、0．11％和1．59％。结论1400TC突变可大大降低CYP2C9的体外酶学活性，提示携带此 突变型的患者在使用经CYP2C9代谢的药物时，药物代谢速度会明显减慢，容易造成体内药物蓄积， 发生潜在的药物不良反应。 【关键词】 细胞色素P450酶系统；突变；酶活性研究；慢代谢 IdentificationofanovelCYP2C9 assessmentofits mutation(1400TC)andenzymaticactivity gene invitro Chuan—bao’．WANG Pei—WU。HUGuo—xin， DA，Da-peng+，LI Shuang—hu，GENG CAl Institute of of of Jian-ping．+KeyLaboratoryGeriatrics．BeifingHospitalBeoingGeriatrics．Ministry Clinical Health， Health，Beijing100730，China；。Departmentof Laboratory，BeqingHospital，Ministryof i Bei珏ng00730．China HChuan．baoandDAl arethe authorswhocontributedtothearticle Da．peng first equally author：CAI Institute CorrespondingJian-ping．KeyLaboratoryofGeriatrics．BeijingHospitalBeijingof Geriatrics，MinistryofHealth，Beijing100730，Chin