TGF-β-%2c1-诱导藻酸钙凝胶负载与脂肪干细胞向软骨细胞分化与研究论文.pdfVIP

·中文论著摘要· TGF．D1诱导藻酸钙凝胶负载的脂肪干细胞 向软骨细胞分化的研究 目 的 将有促进软骨细胞增值作用的TGF．p1与藻酸钙凝胶有机结合，探索组织工程 合适载体，了解TGF．p1对体外培养的藻酸钙凝胶中脂肪干细胞向软骨细胞诱导 分化的作用，为关节软骨缺损的修复提供实验依据 实验材料 州生友生物技术有限公司)；地塞米松，ITS+，牛血清白蛋白，维生素C(Sigma， 美国)，转化生长因子131(PeproTech，美国)；藻酸钙凝胶，II型胶原多克隆抗体， LYOVAC SABC免疫组化试剂盒(武汉博士德生物科技有限公司)；SRKGT2．9冷 冻干燥机(德国)。 实验方法 无菌条件下取双腹股沟脂肪组织约10毫升。充分剪碎约1立方毫米，0．1％的 胶原酶和0．25％胰酶，37C振荡消化15min，基础培养基终止消化，离心，弃上清， 再用基础培养基重悬细胞，接种于培养瓶中，置于37(2、5％C02培养箱中，饱和 湿度条件下培养。20小时后首次换液，以后每三天换液一次，待细胞生长至接近 融合时传代，7．10天达到80,90％融合时首次传代。取传到第4代的脂肪干细胞， 消化，基础培养基重悬。藻酸钙凝胶(Matrixkit)置于12孔板内，完全培养基清洗3 次；按每块5106／ml将细胞悬液用无菌注射器滴于海藻酸钙凝胶表面的凹陷中每 基础培养基半量换成诱导培养基(转化生长因子13150mg／L)，再过24小时后全 量换为诱导培养基，此后每3天换液一次。 实验结果 1．细胞增殖检测：接种细胞后增殖，随着时间延长MTT值升高。 2、大体及显微镜观察 接种细胞悬液后，细胞呈圆形，类圆形附于载体上，随着时间的延长，细胞 逐渐布满整个空隙，并有基质分泌，细胞被包埋于其分泌的基质中，细胞与细胞 之间，细胞与载体之间紧密结合 3、HE染色 培养3周后HE染色可见大量的细胞外基质产生，细胞与细胞间以及细胞与 载体间相互间紧密联结。 4、电镜观察 藻酸钙凝胶有网状的孔隙，利于细胞生长所需物质与能量交换及代谢产物排 泄，细胞黏附于藻酸钙凝胶上，细胞伸展，生长良好，细胞被包埋在其分泌的基 质中，细胞与细胞之间紧密结合，细胞与载体间紧密结合。 5、II型胶原免疫组化检测 免疫组化显示，载体复合物II型胶原呈阳性。 ◆匕 当日结论 1、藻酸钙凝胶对细胞的培养是三维培养，藻酸钙凝胶表面积大，内部孔隙多， 适合于细胞黏附和进行营养交换，有利于细胞附着，生长，增值。 2、TGF．131不仅仅在软骨细胞体外培养过程中有促进作用，在藻酸钙凝胶载 体上同样具有促脂肪干细胞向软骨细胞分化的作用 关键词 组织工程；藻酸钙凝胶；脂肪干细胞；转化生长因子；软骨 2 ·英文论著摘要· 1 onthe factorbeta Study transforminggrowth inducescalcium stem adipose——derived alginate-·loaded cellstodifferentiateinto chondrocytes