纺锤体微管与动点粘连与分子解析.pdf

中文摘要 细胞生命过程中遗传物质的稳定性是通过有丝分裂过程中染色体在两个子 细胞中的均等分配而实施的。细胞有丝分裂纺锤体微管与着丝粒的粘连是通过动 点——组装在着丝粒上的一个巨大的蛋白质复合物而实现的。 高度动态的纺锤体微管粘连染色体需要着丝粒一动点蛋白机器能够正确捕获 微管并保证其粘连的稳定性。当动点与来自于两极的微管粘接，这些不断聚合和 解聚的微管需与一系列蛋白质复合物协同作用才能使染色体排列到赤道板并最 终将遗传信息分配到子代细胞中。对于酵母和蠕虫中大量的动点外层蛋白的研究 有助于对动点外层的结构和功能的解析。由于酵母和蠕虫中的很多蛋白在人类中 都没有同源物，所以对于人类细胞中动点．微管作用网络分子功能的研究至今还 不甚清楚。虽然我们的研究证实马达驱动蛋白cENP—E可以衔接纺锤体微管与动 点并参与检验点调控，可是哺乳动物细胞的动点．微管相互作用的具体分子机理 还知之甚少。到目前为止，还未发现即能与CENP—E作用又参与构筑动点一微管界 面，对染色体分离发挥关键作用的蛋自。有丝分裂的正常进行有赖于检验点的信 号转导才能保证染色体的精确分配。细胞有丝分裂的启动需要细胞周期依赖性激 丝分裂期激酶，对于动点和微管之间的粘附、动点之间张力的产生以及由张力导 致的信号转导和染色体的联会起着重要调控作用。可是，Plkl是如何促使染色体 双极定向运动的机制以及Plkl在动点上的磷酸化底物至今未有报道。 本研究发现一个新的动点蛋白CENP．v，它可以协同CENP—E调节动点一微管 的相互作用。CENP．V在细胞进入G2期开始累积并在有丝分裂的早期定位于动 点。当细胞进入M期染色体排列到赤道板时，CENP-V离开动点并在分裂后期降 解。CENP．V通过与CENP—E的c端相互作用从而稳定动点与纺锤体微管的粘连。 扰动点与微管衔接界面的稳定性并迸一步引起染色体排列错误从而使细胞有丝 分裂周期延迟。CENP—V可以与Plkl在动点上相互作用并被其磷酸化。更为重要 的是，Plkl介导的CENP．V的磷酸化会维持稳定的动点．微管粘连并最终对染色体 正确排列发挥关键作用。综上所述，我们的研究发现了一个新的调控机制，即 Ⅱ CENP．V通过调节动点与纺锤体粘连来调节其下游信号分子的活性来调控纺锤 体微管动力学及完整性，从而行使其有丝分裂调控点的功能。 我们近期的研究阐明NEK2A对于染色体的忠实分离是必需的，可是，有 关NEK2A是如何参与动点．微管粘连的具体机制至今仍不甚清楚。大量的事实证 键组分。最近的研究发现Madl和Mad2定位于动点是依赖于Hecl复合物。我们的 实验发现NEK．2A磷酸化Hecl对于染色体稳定性是必需的。 为了探究NEK2A磷酸化Heel在哺乳动物细胞染色体分离中的机制，我们分 析了体内和体外微管对动点的粘连情况，结果发现NEK2A调控了动点．微管的 粘连，对于染色体的正确分离是必需的。 CENP．EPmlHeel 关键词：动点与微管粘连纺锤体检验点CENP．V ⅡI Abstract cell isorchestratedthe division，chromosome During segregation by dynamic interactionof microtubuleswiththe macromolecular spindle kinetochore，a complex locatedatthecentromereof that studiesshow chromosomes．Althoughprevious