QβRNA复制酶中亚基的共表达对β亚基溶解性的影响.pdfVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 ’( )!! 0’ ) 年 月 #$$! %# !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,+-.+/ #$$! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! ! #$ 复制酶中亚基的共表达对 亚基溶解性的影响 ! ! 王 栋 （江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 无锡 #%!$G ） 摘 要：在体外 和蛋白质合成及自复制系统的研究中， 复制酶作为以 为模板的 聚合酶，是比 I0J K I0J I0J I0J ! 较重要的应用酶种之一。该酶由 个亚基组成，其中只有 亚基是由病毒基因编码，而其他 个亚基都是宿主蛋 ! ! G 白。利用普通表达载体合成 复制酶时，得到的 亚基几乎都是不溶性蛋白，从而影响了 复制酶的活性和产 K! ! K! 率。为尝试提高 亚基的溶解性，构建含有 亚基基因的表达质粒 ，同时利用 （ ）为表达载体 ! ! LMJ* GG:/+L L4#%7 N 表达其他G 个亚基进行共表达研究。不同亚基组合的共表达结果通过O*O:PJQ 分析表明，当 亚基与6:4F:4C ! 亚基共表达时，溶解度有一定的提高，而且可溶性部分也具有复制酶活性。通过调节共表达诱导物浓度，相对增强 可溶性 亚基的表达，可溶性 复制酶酶量得到相应的提高。 ! K! 关键词： 复制酶，共表达， 亚基，溶解性 K! ! 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） K29 J $$$%:#$1 #$$! $:$29$:$; 复制酶最初是来源于 噬菌体的以 的胞内含量比较低，而亚基 和 对 K! K! I0J 6:4C 6:4C 6:4F ［，］ ［ ， ］ % # %; % 为模板的I0J 聚合酶 ，现在常用于体外I0J 的 于 复制酶的合成和功能又具有重要作用 ， K! ! ［，］ G ! 复制及分子进化 、无细胞蛋白质分子的合成以 亚基单独表达时可能会引起其他亚基量的相对不