丹参ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化.pdfVIP

广 西 植 物 Guihaia 28(5)：599— 603 2008年 9月 丹参 ISSR—PCR反应体系的建立与正交优化 李 嵘，王枯之 (陕西师范大学 生命科学学院，西安 710062) 摘 要 ：利用正交试验设计的方法 ，从引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、MgZ+浓度、dNTP浓度4种因素3个 水平，对丹参 ISSR—PCR反应体系进行优化分析，并在此基础上对模板 DNA浓度、PCR反应过程中的退火温 度进行梯度检测 。结果表明：2O LISSR—PCR反应体系中各 因素的最佳浓度为 1×PCRbuffer、200fxmol／L dNTP、1．0x／mol／L引物、1．5mmol／LMg+和1UTaqDNA聚合酶，最佳模板DNA浓度为20~60ng，引物 UBC835的最佳退火温度为51．7℃。 关键词：丹参 ；ISSR—PCR；反应体系 ；正交优化 中图分类号 ：Q943．2 文献标识码：A 文章编号：1000-3142(2008)05—0599-05 EstablishmentandorthogonaloptimizationofISSR- PCR amplificationsystem inSalviamiltiorrhiza LIRong，WANG Zhe—Zhi (CollegeofLi Sciences，ShaanxiNormalUniversity，Xi’an710062，China) Abstract：Inthispaper，theorthogonaldesignwasusedtOoptimizetheISSR-PCR amplificationsystem ofSalvia miltiorrhizainfourfactors(theconcentrationofdNTP，Primers，Mg+ andTaqDNA polymerase)atthreelevels respectively．Then，basedontheoptimalISSR-PCR amplificationsystem ，theconcentrationoftemplateDNA andan— nealingtemperaturewereproposedbygradientPCR．Theresultsshowedthat：asuitableISSR-PCR amplification system ofS．miltiorrhizawasestablished．Inatotalvolumeof2O L ISSR-PCR amplificationsystem，itcontains1× PCRbuffer，200x／mol／LdNTP，1．0*／mol／Lprimer，1．5mmol／LMg2+，1U TaqDNApolymeraseand20~60ng templateDNA．TheoptimalannealingtemperatureforprimerUBC835is51．7℃． Keywords：Salviamiltiorrhiza；ISSR-PCR；amplificationsystem；orthogonaloptimization 丹参 (Salviamiltiorrhiza)属唇形科 (Lamiace— 简单重复序列 间区 (inter—simplesequencere— ae)鼠尾草属 (Salvia)，为多年生草本植物 ，生于海 peat，ISSR)是在简单重复序列(simplesequencere— 拔 100～l300m 的山沟、溪边及林 中阴湿处 ，主要 peat，SSR)分子标记技术基础之上 ，发展起来 的一 分布于我国的安徽、河北、河南、湖北、湖南、江苏、陕 种基于 PCR的新型 DNA分子标记技术 ，由Zietk— 西、山东、山西、浙江及 13本 (Li Hedge，1994)。 iewicz等