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第! 卷 第# 期 深圳大学学报理工版 $%’ ! (%’ #
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文章编号:+)))?!*+@(!))* ))#? )A@? )#
甘露糖外切酶的细胞生物学定位研究
莫 蓓 莘
(深圳大学生命科学学院,深圳A+@)*) )
摘O 要:用不同试剂从西红柿种子提取甘露聚糖外切酶,结果表明甘露聚糖外切酶只能被含高盐的缓
冲液 (
)’ +D%P 1 4LQLI R A)) DD%P 1 (E: ,Q4 S’ ) )提取出来,单独的低盐缓冲液 ()’ + D%P 1 4LQLI ,Q4
S’ ) )或用非盐洗涤剂代替高盐则不能提取该酶C 通过基因枪将甘露聚糖外切酶和2T 融合蛋白转化洋葱
表皮细胞,发现转化了甘露聚糖外切酶和2T 融合蛋白的洋葱表皮细胞壁上有荧光,表明甘露聚糖外切酶
可能定位在细胞壁上C
关键词:基因枪;2T ;洋葱表皮细胞;甘露聚糖外切酶;细胞壁
中图分类号:U !B+O O O O 文献标识码:0
O O 种子萌发是植物营养生长的第一步,其过程始 WKLN 教授 (加拿大 KLQX 大学)惠赠C T:/ 引
[+]
于种子的吸水膨胀,止于胚根从种皮中伸出 C 这 物 T+:08::08000:0008::8::08 ,T! :
是非常复杂的遗传学和生物化学过程,如种子萌发 ::8008:88:8:808:8:8 ,划线部分为
的起始 (干种子的吸水)和终止 (胚根从种皮中伸 VED4+ 切点C 引物设计根据LNLVENY 中收录的甘
出)阶段都存在着许多障碍C 种皮限制是指胚周围 露糖外切酶基因,菌株;4A! 为本实验室保存,西
的组织 (胚乳和种皮)会对胚根的伸出产生机械阻 !#$% ’()#$* (#+,*-+. .),,’ #/ 0,1.$+’ )
红柿种子 (
力,对大多数被子植物,这种阻力来自于胚乳而不 购自于3%YLI 3LLMI ,3’ :EXEZFNLI ,-(’ ,:ENEME ,
[! ]
是种皮 C 对西红柿种子来说,这种种皮限制的克 储存在# [ 干燥器中,洋葱为普通食用,购自当地
[ ]
服,部分是由于胚乳坚硬细胞壁的水解 C 西红柿 农贸市场C
种子胚乳细胞壁的主要成分是半乳甘露聚糖,该成 ! $# 方# 法
分在种子萌发后迅速降解[# ]
C 半乳甘露聚糖的水解 +’ !’ +O 蛋白质提取
是 种酶共同作用的结果:甘露聚糖内切酶,将甘 +) 粒西红柿种子中加入 +’ A D1 各种缓冲液
露聚糖主链切成低聚糖;甘露聚糖外切酶,将低聚 ()’ + D%P 1 的4LQLI 缓冲液,Q4 @’ ) );少量干净
糖进一步降解成单糖;半乳糖外切酶,将甘露聚糖 海砂,在冰冻碾钵中碾碎C 提取物在# [ 离心 +)
上的半乳糖侧链水解C 在西红柿种子中已对这 种 DFN(!+))) \ )C 上清液定容至+’ A D1 ,
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