甘露糖外切酶的细胞生物学定位研究.pdfVIP

第! 卷 第# 期 深圳大学学报理工版 $%’ ! (%’ # !))* 年+) 月 ,-./(01 -2 345(645( .(7$5/3789 3:75(:5 0(; 5(7(55/7( -=’ !))* !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 文章编号：+)))?!*+@（!))* ）)#? )A@? )# 甘露糖外切酶的细胞生物学定位研究 莫 蓓 莘 （深圳大学生命科学学院，深圳A+@)*) ） 摘O 要：用不同试剂从西红柿种子提取甘露聚糖外切酶，结果表明甘露聚糖外切酶只能被含高盐的缓 冲液 （ )’ +D%P 1 4LQLI R A)) DD%P 1 (E: ，Q4 S’ ) ）提取出来，单独的低盐缓冲液 （)’ + D%P 1 4LQLI ，Q4 S’ ) ）或用非盐洗涤剂代替高盐则不能提取该酶C 通过基因枪将甘露聚糖外切酶和2T 融合蛋白转化洋葱 表皮细胞，发现转化了甘露聚糖外切酶和2T 融合蛋白的洋葱表皮细胞壁上有荧光，表明甘露聚糖外切酶 可能定位在细胞壁上C 关键词：基因枪；2T ；洋葱表皮细胞；甘露聚糖外切酶；细胞壁 中图分类号：U !B+O O O O 文献标识码：0 O O 种子萌发是植物营养生长的第一步，其过程始 WKLN 教授 （加拿大 KLQX 大学）惠赠C T:/ 引 ［+］ 于种子的吸水膨胀，止于胚根从种皮中伸出 C 这 物 T+：08::08000:0008::8::08 ，T! ： 是非常复杂的遗传学和生物化学过程，如种子萌发 ::8008:88:8:808:8:8 ，划线部分为 的起始 （干种子的吸水）和终止 （胚根从种皮中伸 VED4+ 切点C 引物设计根据LNLVENY 中收录的甘 出）阶段都存在着许多障碍C 种皮限制是指胚周围 露糖外切酶基因，菌株;4A! 为本实验室保存，西 的组织 （胚乳和种皮）会对胚根的伸出产生机械阻 !#$% ’()#$* (#+,*-+. .),,’ #/ 0,1.$+’ ） 红柿种子 （ 力，对大多数被子植物，这种阻力来自于胚乳而不 购自于3%YLI 3LLMI ，3’ :EXEZFNLI ，-(’ ，:ENEME ， ［! ］ 是种皮 C 对西红柿种子来说，这种种皮限制的克 储存在# [ 干燥器中，洋葱为普通食用，购自当地 ［ ］ 服，部分是由于胚乳坚硬细胞壁的水解 C 西红柿 农贸市场C 种子胚乳细胞壁的主要成分是半乳甘露聚糖，该成 ! $# 方# 法 分在种子萌发后迅速降解［# ］ C 半乳甘露聚糖的水解 +’ !’ +O 蛋白质提取 是 种酶共同作用的结果：甘露聚糖内切酶，将甘 +) 粒西红柿种子中加入 +’ A D1 各种缓冲液 露聚糖主链切成低聚糖；甘露聚糖外切酶，将低聚 （)’ + D%P 1 的4LQLI 缓冲液，Q4 @’ ) ）；少量干净 糖进一步降解成单糖；半乳糖外切酶，将甘露聚糖 海砂，在冰冻碾钵中碾碎C 提取物在# [ 离心 +) 上的半乳糖侧链水解C 在西红柿种子中已对这 种 DFN（!+))) \ ）C 上清液定容至+’ A D1 ，