萃取工艺条件对多聚羟基烷酸中内毒素含量的影响.pdfVIP

第26卷第1期 山西化工 V01．26№．1 2006年2月 岛拍胀IaⅢ、A{Io～LlNDUSTRY F曲2006 豢黼黼瓣嚣 je≈0：x：：j、二艘Ixz!?’：ii：： 萃取工艺条件对多聚羟基烷酸中内毒素含量的影响 肖婧凡，赵建英，赵良启 (山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室．山西太原030006) 摘要：研究了氯仿萃取条件对新型生物材料多聚羟基烷酸(F量iAs)发酵产品中内毒菜含量的影响。 通过正交试验优化萃取条件，建立了一种能降低产品中内毒素含量的萃取工艺。结果表明：将干 细胞加入50倍体积氮仿中，在30℃的条件下，120蚵n反复氯仿溶解乙醇沉淀4次，以离心的方 式进行回液分离，得到№产品的内毒素含量显著辟低。 关键词：多聚羟基烷酸；聚羟基丁酸(PHB)；细菌内毒素；鲎试剂；显色基质法 中周分类号：R318．08文默标识码：A 文章编号：1004．7050C2006)0l—0027—04 由于PHAs为胞内产物，所以必须经破壁或改 引言 变细胞透性才能被分离纯化。如果用革兰氏阴性缨 多聚羟基烷酸(PHAs)是一类由微生物合成的 菌发酵生产PHAs，在破壁提取产物的同时也会致 天然高分子聚酯，因其具有良好的热塑性、压电性、 使内毒素释放而污染PHAs产品，进而影响该产品 光学活性和力学机械性能等物理学特性及优良的生 在医学组织工程方面的应用。因此，在PHAs材料 物可降解性、生物相容性、生物可再生性、表面可修 用于临床之前必须进行内毒素的去除，使之符合 饰性和降解产物无毒性等生物学与环境学特性，已 H)A规定的要求。目前国内外一些学者对PHAs 成为当前生态环境材料和生物医用材料的重要候选 中内毒素的去除方法进行了研究，主要有强氧化剂 材料之一[1|。 法或7一射线照射法。虽然这些方法能够有效去除 目前，多数PHAs的生产菌株为革兰氏阴性细内毒素，但会导致PHAS的分子量降低，使其物理性 菌，而革兰氏阴性细菌细胞壁中含有一种蛋白质、多 能改变，限制了应用范围。倘若能够通过改进 糖和脂类的抗原复合物，即细菌内毒素，当细胞破裂 PHAs的提取方法，最大幅度地降低其内毒素含量。 或溶解时这类物质会被释放出来。内毒素可以使人 使其达到H)A标准，就能够简化或省略内毒素去除 体产生各种临床反应，如果将含有大量内毒素的 工序，降低各种氧化荆对材料性能的影响。然而，目 PHAS用于医疗卫生，特别是医学组织工程方面。会前国内对于这方面的研究尚未见到相关摄道。 使人体发热、头痛、恶心、呕吐和休克，严重时甚至会 本文应用鲎试剂显色基质法测定一种 导致死亡。因此，国内外对于应用于l临床的医疗器 械材料都有严格的要求，例如：美国食品与药品管理 酵生产的干细胞为材料，研究下游提取条件对P腿 局(兀IA)要求医疗器械用具的内毒素含量不得超过产品中内毒素含量的影响，进而优化提取条件，建立 20 Eu僭2，3I。 一种能够获得较低内毒素含量的PHAs分离纯化工 艺。 收稿日期：2005_09一15 基金项目：山西省科技厅攻关项目。 1 试验材料 1’1