从土壤中分离L-色氨酸生产菌株及其高产诱变选育的研究.pdfVIP

维普资讯 从土壤中分离L一色氨酸生产菌株及其高产诱变选育的研究 陈俊峰 ，苏丽娜 ，王 璋 ，王卫卫 1(西北大学生命科学学 院，陕西西安 ，710069) 2(中国食品发酵工业研究院，北京 ，100027) 摘 要 根据微生物菌株生物合成 L一色氨酸代谢途径 的特性，设计 了产色氨酸的细菌选择性分离筛选培养基 ， 对从土壤 中分离得到 的832株细菌通过初筛和复筛，筛选到 6株L一色氨酸产生菌株，并对其进行 了初步分类鉴 定 ，确定 了这 6株菌均为为谷氨酸棒杆菌 (Corynebacteriumglutanicum)。其 中 1株可产L一色氨酸0，85g／L，进 一 步通过NTG 以及紫外线照射多重诱变育种得到苯丙氨酸和酪氨酸双重营养缺陷型与多种色氨酸结构类似物 抗性突变株 ，遗传性状稳定 ，产酸量达到 10，82g／L。 关键词 L一色氨酸，发酵生产 ，土壤分离，菌种筛选 ，诱变育种 目前在工业上 国内外主要利用酶法、前提转化法 葡萄糖 1，蛋 白胨 1，牛 肉膏 0．7，酵母 膏 0．5， 生产 L一色氨酸 ]。利用糖质原料直接发酵生产 L一 NaC10．3，琼 脂 1．6，pH7．2，1．0kg／cm 灭 菌 20 色氨酸国内外报道的不多[3“]，主要是因为L一色氨酸 ra in。 在微生物体内的代谢途径较长且存在着多种严格 的 1．2．2 保藏培养基 ( ) 调节机制 ，致使 L一色氨酸的生产菌株产酸较低 ，达不 蛋 白胨 1，牛肉膏 0．7，酵母膏 0．5，NaC10．3，琼 到工业化生产 的要求 。L一色氨酸的生产菌株主要有 脂 1．6，pH7．2，1．0kg／cm 灭菌 20rain。 谷氨酸棒杆菌 (Corynebacterium glutanicum)、黄色 1．2．3 细菌选择性培养基 ( ) 短杆菌 (Brevibacterium flavum)、枯草芽孢 杆菌 牛肉膏 1．0，蛋白胨 1，酵母 膏 0．5，NaC10．3，制 (Bacillussubtilis)、大肠杆菌 (Escherichiacoli)和产 霉 菌素 (nystatin)30~g／mL，放线菌酮 (cyclohexi— 朊假丝酵母 (Candidautilis)等 ，但绝大 多数为细 mide)30,／g／mL，琼脂粉 1．6，pH7．2，1kg／cm 灭菌 菌。 目前 ，还没有关于从土壤 中直接分离筛选实用性 20rain后添加色氨酸结构类似物 1～3种 。 L一色氨酸生产菌株的研究报告 。笔者利用细菌生物 1．2．4 种子培养基 ( ) 合成L一色氨酸代谢途径的特点 ，设定 了分离筛选产 葡萄糖 4．0，(NH )SO 0．4，玉米浆 3．0，酵母 酸菌株的细菌选择性培养基 ，并通过初筛和复筛 ，从 膏 0．5，K2HPO4·3H2O0．1，KH2PO4·3H2O0．1， 土壤中筛选到几株产色氨酸的谷氨酸棒杆菌的野生 MgSO4·7H2O 0．025。Fe2SO4 ·7H2O 10mg／L， 菌株；再通过进一步的诱变，明显提高产酸水平 ，有望 MnSO4·H2010mg／L，pH 7．2，0．75kg／cm 灭菌 达到工业化生产 的要求。 15ra in。 1．2．5 筛选发酵培养基 (％) 1 材料与方法 蔗糖 lO，(NH )2SO 2，K2HPO 0．05，KH2PO 1．1 土壤、活性污泥样品来源 0．05，MgSO4 ·7H2O0．025，玉米浆 2。FeSO410 mg／L，MnSO410mg／L，CaCO32 (分 别 灭 菌